尼克翻译公司(nick translation)和底漆延伸(primer extension)的区别
缺口翻译和引物延伸是分子生物学中的两项重要技术。缺口翻译和引物延伸的关键区别在于,缺口翻译过程为其他杂交技术产生了标记探针,而引物延伸法则从混合物中识别出特定的RNA序列,并揭示了mRNA的表达信息。这两种技术都非常重要,通常在分子研究实验室中进行。
内容1。概述和关键差异2。尼克翻译3是什么。什么是底漆延伸4。并排比较–Nick Translation与Primer Extension5。摘要
什么是尼克翻译公司(nick translation)?
缺口翻译是一种重要的DNA标记方法,用于制备各种分子生物学技术,如印迹法、原位杂交法、荧光原位杂交法等。DNA探针用于识别特定的DNA或RNA序列。在标记探针的帮助下,可以从复杂的核酸混合物中标记或可视化特定片段。因此,使用各种技术制备标记探针,以用于不同的技术。缺口翻译是一种利用DNA酶1和DNA聚合酶1酶产生标记探针的方法。
缺口翻译过程始于DNase-1酶的活性。DNase 1通过切割核苷酸之间的磷酸二酯键,在双链DNA的磷酸主链上引入刻痕。一旦缺口形成,就会产生游离的3'羟基核苷酸,DNA聚合酶1酶将作用于它。DNA聚合酶1的5′至3′核酸外切酶活性从缺口向DNA链的3′方向去除核苷酸。同时加入聚合酶1的核苷酸,以取代聚合酶的活性。如果核苷酸被标记,则会被标记的核苷酸取代,并标记DNA以供识别。这种新合成的标记DNA可作为分子生物学中各种杂交反应的探针。
什么是底漆延伸(primer extension)?
引物延伸是一种从RNA混合物中寻找特定RNA序列并定位mRNA转录物5'端的技术。它也被用来研究RNA的结构和表达。引物延伸法是用标记引物或标记核苷酸进行的。如果使用标记引物,则不需要标记用于cDNA合成的核苷酸。这项技术有几个步骤。它首先从样本中提取RNA。然后将标记的寡核苷酸引物与必要的成分一起添加到混合物中,以合成特定RNA序列的cDNA。底漆退火与互补序列的混合物。以引物退火序列为模板,酶逆转录酶合成RNA序列的互补DNA(cDNA)。引物退火和反转录只有在样品中存在特定的RNA序列时才会发生。最后,当进行变性凝胶电泳时,可以确定RNA序列的大小。用引物延伸法也很容易找到mRNA(转录起始位点)序列的+1碱基。如果使用过量的引物,样品中存在的mRNA量可以用这种方法定量。
尼克翻译(nick translation)和底漆延伸(primer extension)的区别
缺口翻译vs初级延伸 | |
缺口翻译是一个为各种杂交反应创造标记DNA探针的过程。 | 引物延伸是一种用来寻找特定RNA或研究基因表达的技术。 |
使用的酶 | |
DNA酶和脱氧核糖核酸酶1。 | 使用逆转录酶。 |
重要性 | |
缺口翻译有助于标记特定的DNA序列。 | 引物延伸可以检测特定的mRNA序列大小和样本中存在的量。 |
总结 - 尼克翻译公司(nick translation) vs. 底漆延伸(primer extension)
缺口翻译是一种基于DNA酶1和大肠杆菌DNA聚合酶1酶活性合成标记探针的方法。它是在不同杂交技术之前在实验室中使用的一种体外方法。在缺口翻译过程中,DNA聚合酶1的5'-3'核酸外切酶活性去除缺口前面的核苷酸,DNA聚合酶1的聚合酶活性用缺口后面的标记核苷酸代替去除的核苷酸。引物延伸法是一种从混合物中检测特定RNA转录物并量化感兴趣RNA的大小和数量的方法。尼克和引文之间的区别就在于翻译。
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