限制性片段长度多态性,或称RFLP,是同源DNA序列的一种变异。多态性是发生在个体之间的同源DNA的变异,而限制性一词是指可以用限制性酶从一大块DNA上切下小段。一些DNA部分比其他部分具有更多的变异性,具有高度变异性的部分在限制性片段长度多态性分析中很有用。
限制性片段长度多态性依赖于限制性内切酶的活性。这类酶在许多细菌物种中都有。在细菌中,限制性内切酶的作用是通过将其分解成碎片,对进入的外来DNA提供保护。在分子研究中,限制性酶可用于在已知的变异点上对DNA进行分割,以便对产生的片段进行分析。
每种类型的酶都能识别特定的DNA碱基对序列,并在其识别该序列的任何一点上发挥作用,裂解DNA分子。细菌用一种独特的DNA甲基化模式保护它们自己的DNA不被破坏,以防止限制性内切酶的结合。目前已经发现了800多种不同的限制性内切酶,它们共同识别100多种独特的核苷酸序列。大多数被识别的序列的长度在4到6个碱基对之间。
限制性酶在生物技术中被用来分析限制性片段长度多态性,原因有很多。这些酶被用来在某些序列上切割DNA长度,从而可以检查个体之间的差异。在某些已知的核苷酸序列上切割的片段DNA溶液与旨在检测预先定义的DNA序列的探针进行杂交。然后用凝胶电泳对样品进行分析。这种技术产生的凝胶有多条深色染色带,每条染色带代表一个不同的DNA片段。通过检查染色的模式,科学家可以确定样品中存在的RFLPs模式。
多态性广泛出现在整个人类基因组中,对这些多态性的分析证明,不同群体的人往往有共同的RFLPs。例如,某些RFLP类型是不同种族群体或地理起源的人所共有的,而且家族群体内也存在联系。这种变异存在于整个动物界,使得它不仅是追踪人类祖先的有用研究工具,也是研究野生动物迁移和进化的有用工具。
限制性片段长度多态性的分析可以为临床和医疗目的提供有用的信息。限制性片段长度多态性探针被用于亲子鉴定、遗传性疾病的诊断、法医学和基因分型。分析整个基因组的RFLPs模式是DNA指纹技术的基础,该技术是所有这些不同用途的基础。
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