第1部分第1部分，共3部分：样品制备

1. 1打开分光光度计。大多数分光光度计需要预热才能给出准确的读数。在运行任何样品之前，打开机器并让其静置至少15分钟。利用预热时间准备样品。

2. 2清洁反应杯或试管。如果你在学校做实验室，你可能会使用不需要清洗的一次性试管。如果你使用的是反应杯或可重复使用的试管，请确保它们在使用前已正确清洁。用去离子水彻底冲洗每个反应杯。小心反应杯，因为它们可能非常昂贵，尤其是如果它们是由玻璃或石英制成的。石英反应杯设计用于紫外-可见分光光度法。在处理反应杯时，避免接触光线将通过的一侧（通常是容器的透明侧）。如果你不小心碰到了这些面，用kimwipe擦拭杯（其配方是为了防止刮伤玻璃）。

3. 3将适当体积的样品装入反应杯。有些反应杯的最大体积为1毫升（mL），而试管的最大体积为5毫升。只要产生光的激光穿过液体而不是容器的空部分，你就能得到准确的读数。如果使用移液管装载样本，请为每个样本使用新的尖端，以防止交叉污染。

4. 4准备一个控制方案。对照溶液称为空白溶液，只有溶解待分析溶质的化学溶剂。例如，如果你把盐溶解在水中，你的空白就只是水。如果你把水染成红色，毛坯也必须含有红色的水。坯料与待分析溶液的体积相同，并保持在同一容器中。

5. 5擦拭反应杯的外部。在将反应杯放入分光光度计之前，您需要确保它尽可能干净，以避免灰尘或灰尘颗粒的干扰。使用无绒布去除反应杯外部的水滴或灰尘。

第2部分第2部分，共3部分：运行实验

1. 1选择并设置用于分析样品的光波长。使用单一波长的光（单色）使测试更有效。所选光的颜色应为已知被测试溶质中的一种化学物质吸收的颜色。根据分光光度计的规格设置所需的波长。在教室实验室里，波长很可能会给你。由于样品将反射与表面颜色相同的所有光，因此实验波长将始终与样品的颜色不同。物体之所以显示为特定颜色，是因为它们反射特定波长的光，并吸收所有其他颜色。草是绿色的，因为其中的叶绿素反射绿光并吸收其他一切。

2. 2用毛坯校准机器。将坯料放入试管夹中并关闭盖子。在模拟分光光度计上，将有一个带有指针的屏幕，该指针根据光检测的强度移动。当空白时，你应该看到针向右移动。记录此值，以备以后需要。在机器中的空白处，使用调整旋钮将指针移动到零。数字分光光度计也可以用同样的方法校准，它们只有一个数字读数。使用调整旋钮将空白设置为0。当您删除空白，校准仍将到位。当测量剩余的样品时，从空白处的吸收将自动减去。确保每次使用一个空白，以便每个样品校准到相同的空白。例如，如果你清空分光光度计，然后只分析部分样品，然后再次清空，剩下的样品将不准确。你需要重新开始。

3. 3去除空白并测试校准。随着空白去除，针应该停留在0（零）或数字读数应该继续读取0。将毛坯放回机器中，确保针头或读数不会改变。如果机器正确地用你的空白校准，一切都应该保持在0。如果针头或读数不为0，则用空白重复校准步骤。如果仍有问题，请寻求帮助或检查机器进行维护。

4. 4测量实验样品的吸光度。取出毛坯并将实验样品放入机器。将反应杯滑入指定槽中，并确保其直立。等待大约10秒钟，直到指针稳定或数字停止变化。记录%透射率和/或吸光度的值。吸光度也称为光密度（OD）。透射的光越多，样品吸收的光就越少。通常，您需要记录吸光度值，通常以小数形式给出，例如0.43。如果你得到了一个离谱的结果（比如0.900，而其余的都在0.400左右），稀释样品并再次测量吸光度。对每个样品重复读数至少3次，并将其平均。这确保了更准确的读数。

5. 5用连续波长的光重复测试。你的样品可能有多个未知化合物，它们的吸光度随波长而变化。为了消除不确定性，在整个光谱中以25 nm的间隔重复读数。这将使您能够检测到溶质中怀疑存在的其他化学物质。

第3部分第3部分，共3部分：分析吸光度数据

1. 1计算样品的透光率和吸光度。透射比是通过样品到达分光光度计的光的多少。吸光度是指溶质中的一种化学物质吸收了多少光。许多现代分光光度计都有透射率和吸光度的输出，但如果你记录了强度，你可以计算这些值。通过将穿过样品溶液的光的强度与穿过空白的量除以找到透射率（t）。它通常用小数或百分比表示。T＝I/I0，其中I是样本的强度，I0是空白的强度。吸光度（A）表示为透射率值以10为底的对数（指数）的负数：A=-log10T。对于0.1的T值，a的值为1（0.1是10的-1次方），这意味着10%的光被透射，90%被吸收。对于0.01的T值，a的值为2（0.01是-2次方的10），这意味着1%的光被透射。

2. 2在图表上标出吸光度值与波长的关系。将吸光度值绘制在垂直y轴上，并与水平x轴上绘制的用于给定测试的光波长相对照。绘制每个受试光波长的最大吸光度值，生成样品的吸光度光谱，并确定构成受试物质的化合物及其比例。吸收光谱通常在特定波长处有峰值，可以让你识别特定的化合物。

3. 3将你的吸收光谱图与特定化合物的已知图进行比较。化合物具有独特的吸收光谱，每次测量时都会在相同的波长下产生一个峰值。通过将未知化合物的图与已知化合物的图进行比较，可以确定组成溶液的溶质。您也可以使用此方法来识别样本中的污染物。如果你期望在一个特定的波长有一个清晰的峰值，而在不同的波长有两个峰值，你就知道你的样品中有些不对劲。