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ブロッティングは、分子生物学において、DNA、RNA、タンパク質**の混合物の明確な配列を検出するための重要な技術である。これはブロットという膜を使って行われます。ブロッティングの手法には、ノーザンブロッティング、サザンブロッティング、ウェスタンブロッティングなどがあります。非特異的**結合や誤検出を防ぐため、ブロッティングには適切なメンブレンを慎重に選択する必要があります。吸収膜は、ニトロセルロース、ナイロン、ポリフッ化ビニリデンなどが一般的に使用されている。それぞれ異なる特徴を持っています。ニトロセルロース膜とナイロン膜の大きな違いは、ニトロセルロース膜はタンパク質の固定化能が高く、ナイロン膜は核酸の固定化能が高いことである。しかし、ブロッティング技術では、どちらのタイプの膜もよく使用されます。
目次1. 概要と主な違い2. ニトロセルロース膜とは3. ナイロン膜とは4. 横から見たニトロセルロースとナイロン膜の比較5. まとめ
ニトロセルロース膜は、核酸やタンパク質のブロッティング技術において、メンブレンフィルターとして一般的に使用されています。高いタンパク質結合能を有する。そのため、ニトロセルロース膜はプロテインブロッティング技術に広く使用されています。ニトロセルロース膜は、あらゆるハイブリダイゼーション技術に対応し、干渉を受けることなく優れた結合能を発揮します。ニトロセルロース膜はもともと親水性である。分子と親水的に相互作用し、分子を効果的に膜に固定する。市販のニトロセルロース膜は、0.45μmと0.2μmの2種類の孔径があります。
図01:ウェスタンブロッティング用ニトロセルロースメンブレン
ナイロンメンブレンもウィッキング技術に使用される商用メンブレンです。また、ニトロセルロース膜を用いたサザンブロッティングやノーザンブロッティングにも使用可能です。ナイロン膜は、DNAとの結合親和性が高いため、ニトロセルロースよりもサザンブロッティングに適しています。ナイロン膜は、そのユニークな特性から、サザンブロッティングやノーザンブロッティングにおいて、ニトロセルロース膜の代わりによく使用されます。また、ナイロン膜はニトロセルロースと異なり、剥離・再製造にもおすすめです。
図02:サザンブロッティング用ナイロンフィルム
ニトロセルロース膜とナイロン膜の比較 | |
ニトロセルロース膜は壊れやすい。 | ナイロンフィルムは壊れにくくなっています。 |
ハンドリング | |
扱いが難しいのです。 | 扱いやすいのです。 |
非難 | |
無支持のニトロセルロース膜は再生が困難です。 | ナイロンフィルムで簡単にリメイクできます。 |
様々な保存条件への適合性 | |
ニトロセルロース膜は強度が弱く、さまざまな保存条件に耐えることができない。 | ナイロンフィルムは、様々な保存条件に対応することができます。 |
使用方法 | |
プリウエットが必要です。 | ナイロンフィルムはプリウエットの必要がない。 |
親水性 | |
ニトロセルロース膜はもともと親水性であるが、ナイロン膜ほど親水性は高くない。 | 元々親水性が高い。 |
固定化ポテンシャル | |
ニトロセルロース膜は、核酸への親和性は低いが、タンパク質への親和性は高い。 | ナイロン膜はニトロセルロース膜に比べ、核酸結合能が高い。 |
ニトロセルロースやナイロン膜は、ゲル上のバンドパターンを再現するための特殊な薄型シートです。混合物を膜に固定化することで、混合物中の特定の配列やタンパク質を検出することができるのだ。分子を膜に固定化すると、標識プローブを用いたハイブリダイゼーション解析の基質として使用することができる。ニトロセルロース膜は、タンパク質との結合親和性が高いため、タンパク質の検出に広く使用されています。ナイロンメンブレンは、サザンブロッティングやノーザンブロッティングによく使用されます。これがニトロセルロース膜とナイロン膜の違いです。
R 参考文献:1.Hayes, P.C., C.R. Wolf and J.D. Hayes. "Study of blotting techniques for DNA, RNA and protein.".英国医学雑誌:British Medical Journal. u, U.S. National Library of Medicine, 14 Oct. 1989.レティクラム 2017年4月7日マームード、タリン、ヤン、P.C.また、"Western imprinting: technology, theory, and troubleshooting," North American Journal of Medical Sciences, mednow Publicati*** & Media Pvt Ltd, September 2012. "西洋の刷り込み:技術、理論、トラブルシューティング".Web. 2017年4月7日。