PCRとReal Time PCRの比較

PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）は、1983年に化学者のカリー・マリスによって発表された、現代の分子生物学における革命的な発見である。複雑なDNAの中の1つの配列を増幅して解析することができる。ポリメラーゼ連鎖反応の基本的な考え方は、相補的なDNA配列の反対側の鎖である2つのプライマーを互いに向け合い、プライマーは、それぞれもう一方のプライマーを含む相補鎖を生成するというものである。PCRでは、プライマーを増幅するためにDNAポリメラーゼという酵素が使われる。 DNAポリメラーゼは、鋳型DNAを変性させるための高温（94〜95℃）に耐えられる耐熱性のある酵素であり、この耐熱性を利用してPCRを行う。

PCRでは、変性、プライマーアニーリング、DNA合成の3段階が繰り返される。この反応を行うためにサーマルサイクリングマシンが使用され、温度を素早く正確に変化させるようにプログラムすることができる。PCRの用途としては、犯罪捜査、DNA指紋採取、病原体検出、初期のヒトDNA分析などが挙げられる。

ルーチンPCRとは何ですか？

従来のPCRは、DNA増幅段階、PCR分離、産物検出の3つの主要な段階がある。DN**セグメントの分離は、通常アガロースゲル電気泳動によって行われる。その後、生成物は臭化エチジウムで染色される。最後に、紫外線照射下でゲル上のバンドが可視化されることで検出が行われる。そのため、従来のPCRの最終結果は数字で表すことができない。通常、従来のPCRでは1つのパラメータしか検出できない。

リアルタイムPCRとは？

生成物の合成中に、リアルタイムPCRは生成物の増幅を検出することができます。科学技術の発展に伴い、PCRは特に食品中の細菌の検出・同定において非常にポピュラーな技術となっています。リアルタイムPCRでは、蛍光色素システムと蛍光検出機能付きサーマルサイクラーを使用します。

コンベンショナルPCRとリアルタイムPCRの違いは何ですか？

-従来のPCRは、増幅されたPCR産物を分析するためにゲル電気泳動を使用するため、より時間がかかる。これに対し、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（real-time-PCR）は、反応の初期段階で増幅を検出するため、時間をかけずに測定できる。

-リアルタイムPCRは、従来のPCRが反応終了時にデータを収集するのに対し、PCRの指数関数的な成長段階でデータを収集します。

-従来のPCRのエンドポイント結果は精度が低いかもしれないが、リアルタイムPCRの結果は非常に正確である。

-リアルタイムPCRは従来のPCRよりも感度が高い。

-従来のPCRは分解能が非常に低いのに対し、リアルタイムPCRは分解能が高いため、ごくわずかな変化も検出することができます。

-従来のPCRエンドポイント検出では短いダイナミックレンジ、リアルタイムPCR検出では広いダイナミックレンジが得られます。

-リアルタイムPCRは、従来のPCRと異なり、自動検出技術を持っています。

-従来のPCRはリアルタイムPCRに比べ、より複雑で手間がかかる。

-リアルタイムPCRと異なり、従来のPCRでは死菌と生菌を区別することができない。