重要な違い - in situ hybridisationと免疫組織化学の比較

がんや感染症の診断は、新しいプロテオミクスやゲノミクス技術を使って、腫瘍や感染細胞、その増殖や細胞の発生部位を特定し、ほとんどの感染症や非感染症の遺伝的基盤を解析するのが一般的な傾向です。これにより、精密な薬物加工や設計が可能となり、疾病に合わせた治療法の開発が期待できます。in situ hybridisation（ISH）と免疫組織化学（IHC）は腫瘍生物学において最も広く用いられている技術ですが、in situ hybridisationと免疫化学の重要な違いは、解析プロセスで使用される分子にあります。ISHでは核酸プローブを用いた解析が行われ、IHCではモノクローナル抗体やポリクローナル抗体を用いた診断アッセイが行われる。

カタログ

1. 概要と主な相違点 2. in situ hybridisation とは 3. 免疫組織化学とは 4. in situ hybridisation と免疫組織化学の類似点 5. 並べて比較 - in situ hybridisation と免疫組織化学の表形式 6. まとめ

in situハイブリダイゼーション（ISH）は何ですか？

In situ ハイブリダイゼーションは、組織、組織全体、細胞の一部または全部に直接行う核酸ハイブリダイゼーション技術である。この技術は、ワトソン・クリックの相補的塩基対理論に基づき、DNA-DNAハイブリッドやDNA-RNAハイブリッドを生成し、変異遺伝子の検出や目的の遺伝子の同定を行うものである。ハイブリダイゼーション技術では、一本鎖DNA配列、二本鎖DNA配列、一本鎖RNA配列または合成オリゴヌクレオチド配列がプローブとして用いられ、これらのプローブは、放射性同定のためにその5'末端に放射性リンを標識するか蛍光性色素で標識されている。使用するプローブの種類と、それに続く可視化技術の種類によって、さまざまなタイプのISH技術を使用することができます。

図01：蛍光in situハイブリダイゼーション

ISHは、主に感染症の分子診断において、病原体の存在を確認し、分子診断によって病原体の特徴を明らかにするために、幅広い用途に使用されている。また、発生生物学、核型分析、系統解析、染色体の物理的マッピングにも応用されています。

免疫組織化学（ihc)は何ですか？

IHC法では、主に抗原を分析対象とします。IHCでは、モノクローナル抗体やポリクローナル抗体を用いて、感染細胞や悪性細胞の増殖状態における抗原の有無を判定する。抗原抗体結合を利用した手法で、この手法には酵素マーカーが使用されており、その応用として酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）がある。また、マーカーは蛍光標識抗体や放射性標識抗体であってもよい。

図02：免疫組織化学

IHCは、がん細胞の検出に広く用いられている。この診断方法は、腫瘍細胞上の抗原をターゲットとして、腫瘍の同定と特徴づけを行うものです。また、感染症の診断にも同じ手順で行われます。また、モノクローナル抗体やポリクローナル抗体は、目的のタンパク質と鋳造される合成抗体との間で抗体抗原結合反応を起こすことにより、異なる遺伝子産物の分析に使用することができます。

in situハイブリダイゼーションと免疫組織化学の共通点

• ISH、IHCは特異性の高い反応です。
• どちらの技術も非常に精密です。
• どちらの技術も、がんや感染症の診断に利用することができます。
• これらの技術は、無菌のin vitro環境で実施されます。
• どちらの方法も、再現性の高い結果を得られる高速な技術です。
• ISHやIHCは、放射性同位元素や蛍光法などの検出方法を用います。

in situハイブリダイゼーションと免疫組織化学の違い

概要 - in situハイブリダイゼーション vs. 免疫組織化学

分子診断学は、がんのような非感染性疾患やHIV、結核などの感染症において、病気の発現につながる細胞の分子マーカーをもとに、迅速かつ確定的に診断する方法である。分子マーカーには、タンパク質が発現しているものと、遺伝子レベルのものがあり、これらに基づくさまざまな新しい技術が導入され、コストはかかるが、効率が良く、手間がかからない。したがって、ISHはその形成にDNA-DNAまたはDNA-RNAハイブリダイゼーションに依存し、IHCは抗体と抗原の間の特異的反応に依存する。ここがin situ hybridisationとの違いです。

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引用

1Durayan, Jeyapradha et al.「免疫組織化学の応用」、Journal of Pharmacy and Biochemistry、Medknow Publicati*** & Media Pvt Ltd、2012年8月、こちらから入手可能です。アクセス数：2017年8月24日"インサイチュハイブリダイゼーション（ISH）"National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine, available here. accessed 24 Aug. 2017.2 "In Situ Hybridization (ISH)", National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.