直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の大きな違いは、直接免疫蛍光法が1つの抗体で標的を標識するのに対し、間接免疫蛍光法では2つの抗体で標的を標識することです。

免疫蛍光法またはセルラーイメージング法は、特定の標的抗原を蛍光体で標識する技術である。ここでいう蛍光体とは、光によって励起され、光を再放出する蛍光化合物のことである。蛍光色素が標的抗原に結合すると、試料中の標的分子を検出することができる。さらに説明すると、抗原が特定の抗体と結合すると、蛍光色素と結合することができる。そのため、顕微鏡で見ると、抗原が容易に検出される。

また、免疫蛍光法には、直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法がある。直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の違いは、主に使用する抗体の数と蛍光色素の結合の有無にある。つまり、直接免疫蛍光法では、蛍光色素は一次抗体に直接結合し、間接免疫蛍光法では、蛍光色素は二次抗体に結合している。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. 直接免疫蛍光法とは 3. 間接免疫蛍光法とは 4. 直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の類似点 5. 横並び比較-表形式での直接・間接免疫蛍光法 6. まとめ

直接免疫蛍光法は何ですか？

免疫蛍光法は、抗体を用いて特定の標的抗原を検出する方法である。直接免疫蛍光法は、2種類の免疫蛍光法のうちの1つである。直接免疫蛍光法では、抗体（一次抗体）が関与し、蛍光物質が一次抗体に直接結合する。抗体が標的抗原に結合すると、蛍光体が蛍光を発し、蛍光顕微鏡で検出することができる。

図01：直接免疫蛍光法

しかし、直接免疫蛍光法は、一次結合抗体が二次抗体よりも高価であるため、高価な方法である。しかし、追加のステップを伴わないため、より短時間で済む手法である。また、直接免疫蛍光法では、非特異的**結合が減少しています。その結果、種の交差反応性は低い。しかし、検出という点では、直接免疫蛍光法は間接免疫蛍光法に比べて感度が低い。

間接免疫蛍光法は何ですか？

間接免疫蛍光法は、免疫蛍光法の2番目のタイプで、標的抗原を標識する際に、一次抗体と二次抗体のような2種類の抗体を使用するものです。この方法では、二次抗体に蛍光体が結合している。そのため、この手法では、さらに一手間かけることになります。

図02：免疫蛍光法

しかし、この方法は、複数の蛍光色素が二次抗体に結合できるため感度が高く、検出が容易である。また、間接免疫蛍光法は、二次抗体が安価で結合しやすいため、コストがかからないという特徴があります。間接法は、直接免疫蛍光法よりも種間交差反応性が高い。

直接と間接免疫蛍光法の共通点

• これらは、2種類の免疫蛍光法である。
• どちらの方法も一次抗体と蛍光体が関与しています。
• 同時に、どちらの方式でも抗原抗体反応が起こる。
• また、直接免疫蛍光法も間接免疫蛍光法も、蛍光顕微鏡を使って抗原を検出するものである。

直接と間接免疫蛍光法の違い

免疫蛍光法は、使用する抗体への蛍光体の結合を直接的または間接的に利用することができます。直接免疫蛍光法では、蛍光色素は一次抗体に結合しており、この技術に関与するのは一次抗体である。一方、間接免疫蛍光法では、蛍光色素は2つの抗体のうちの1つである2次抗体に結合している。したがって、直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の主な違いは、蛍光色素に結合する抗体の種類にある。

以下のインフォグラフィックは、直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の比較です。

概要 - 直接 vs. 間接免疫蛍光法

免疫蛍光法は、試料中の特定の**抗原の存在を検出するために用いられる技術である。この技術では、特定の抗体を使用します。そのため、この場合は、抗体と蛍光体を組み合わせて、蛍光顕微鏡で検出することになります。また、免疫蛍光法には、直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の2種類がある。直接免疫蛍光法は、抗体とその抗体に直接結合する蛍光体から構成される。間接免疫蛍光法は、一次抗体と二次抗体の2つの抗体と、二次抗体に結合する蛍光物質で構成されています。間接免疫蛍光法は、一次抗体に複数の二次抗体が結合でき、二次抗体に複数の蛍光体が結合できるため、直接法よりも感度が高い。また、間接法は直接法に比べて安価である。したがって、これが直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法の違いである。

引用

1. "免疫蛍光法"、ウィキペディア、ウィキメディア財団、2018年8月19日。ここから入手できます。