主な違い-ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー

クロマトグラフィーには、ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーの3種類があります。ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーの主な違いは、クロマトグラフィー技術で使用される固定相の種類です。その固定相はシリカゲルを使用しており、シリカゲルは固定相として機能する。

クロマトグラフィーは、タンパク質や糖質などの生体分子の分離・同定に重要な生物物理学的手法である。クロマトグラフィーは、溶解度、サイズ、電荷に基づいて化合物を分離します。クロマトグラフィーは、分離のメカニズムから、イオン交換、吸収、分配、粒子径排除などの機構を採用しており、ペーパークロマトグラフ、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーの3つの手法がある。ペーパークロマトグラフは、化合物の固液吸着と溶解を利用したもので、固定相にセルロース紙を使用しています。薄層クロマトグラフィーは、分子の固液吸着を利用したものです。通常、アルミナやシリカでできた固定相と、移動相、すなわち溶媒を有している。カラムクロマトグラフィーは、マトリックスを充填したカラムを用い、主に分子の大きさ、親和性、電荷に基づいて分子を分離するものである。

カタログ

1. クロマトグラフィーの概要と主な違い 2. ペーパークロマトグラフィーとは 3. 薄層クロマトグラフィーとは 4. カラムクロマトグラフィーとは 5. ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー間の類似性 6. 並べて比較 -ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー 7. まとめ

ペーパークロマトグラフィーは何ですか？

クロマトグラフィーは最もシンプルな分析方法であり、幅広いクロマトグラフィーの研究に適用できるものではありません。主に学生の研究室で、混合物中のアミノ酸や炭水化物などの生体分子を同定するために使用されています。ペーパークロマトグラフは、セルロース紙やワットマン濾紙などの固定相と、通常n-ブタノールなどの有機溶媒で調製される移動相を使用します。固定相は水で飽和しているので、固定相は液体である。このように、移動相の存在下で化合物を見つけ出して走らせると、化合物の溶解度によって分離される。その結果、クロマトグラムをプロットした後、染色を行うことで、各化合物の長さを決定することができる。ここからリテンションファクターを算出することができます。

図01：ペーパークロマトグラフィー

ペーパークロマトグラフは、溶媒の流れ方向によって、さらに昇降型ペーパークロマトグラフと降下型ペーパークロマトグラフに分けられます。

薄層クロマトグラフィーは何ですか？

薄層クロマトグラフィー（TLC）は、混合物中の異なるアミノ酸やタンパク質の同定によく使われる手法です。固液吸着による分離技術です。薄層クロマトグラフィーでは、酸化アルミニウムやシリカでできたプレートを固定相として使用します。混合溶媒は必要に応じて異なり、n-ブタノール、酢酸、水などの有機化合物の異なる組み合わせで調製することができる。分離したい化合物をプレートにスポットし、溶媒混合液に浸す。極性板の毛細管現象によって溶媒が上方に移動すると、板上の化合物も溶媒に対する溶解度によって移動する。

図02：薄層クロマトグラフィー

クロマトグラムの後のスポットは、異なる染色手順で調べました。ニンヒドリン染色という、かなり毒性の強い染色方法を使うものもあります。最近の薄層クロマトグラムでは、実行後にクロマトグラムを見るために蛍光技術を使用しています。移動距離に応じて、各化合物の保持時間を算出することができます。TLCは主にタンパク質混合物中のアミノ酸の同定や、混合物中に存在する異なる種類の単糖の分離に使用されます。

カラムクロマトグラフィーは何ですか？

カラムクロマトグラフィーとは、カラムを用いた分離方法を用いた多くの種類のクロマトグラフィー技術を指す広い用語である。カラムクロマトグラフィーでは、物理的なカラムと充填剤を使って化合物を分離する。分離は、化合物が示す異なる物理的性質に基づくことができる。これらの特性は、電荷、サイズ、3次元コンフォメーション、および結合能である。このように、マトリックス物質を充填したカラムを固定相とし、カラムに塗布した洗浄バッファーを移動相として使用する。

分子の大きさによって分離されている場合、化合物が通過するための孔を残すように充填材を充填する。その結果、孔を通れない大きな分子が先に溶出され、小さな分子は溶出に時間がかかる。

図03：カラムクロマトグラフィー

分子を電荷に基づいて分離する場合、固定相にはその電荷に応じて陰イオン交換体または陽イオン交換体が含まれ、化合物は引き寄せられる。したがって、洗浄ステップでは、結合していない化合物が溶出されることになる。溶出バッファー添加後、結合状態の帯電化合物が溶出される。これらの溶出物の検出は、主に分光光度法に基づいている。

かみなりしょうとカラムクロマトグラフィーの共通点

• アミノ酸、タンパク質、糖質などの生体分子の分離には、全紙薄層クロマトグラフィーとカラムクロマトグラフィーの3つの手法が用いられている。
• 紙の薄層クロマトグラフィーとカラムクロマトグラフィーの技術は、移動相と固定相があります。
• 紙の薄層やカラムのクロマトグラフィー技術は、生物物理学的なメカニズムを利用して分離する。

かみなりしょうとカラムクロマトグラフィーの違い

概要 - かみなりしょう vs. カラムクロマトグラフィー

ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーは、タンパク質、アミノ酸、糖質（主に単糖類）などの生体分子を分離するための分離技術です。ペーパークロマトグラフは、セルロース紙を固定相とし、固液の吸着による分離機構を持つ。分子は移動相への溶解度によって、固定相上で分離される。カラムクロマトグラフィーは、化合物のサイズ、形状、電荷、分子量などの物理的性質を利用して分離する。充填されたカラムが固定相で、洗浄液が溶媒相です。これが、紙薄層クロマトグラフィーとカラムクロマトグラフィーの違いです。

引用

クラーク、ジム"Thin Layer Chromatography", Thin Layer Chromatography, 2007.こちらから入手可能です 2.コスクン，オズレム.「分離技術：クロマトグラフィー法」，イスタンブール北クリニック，ケア出版，2016年。こちらで入手可能です 2. Coskun, Ozlem."分離技術：クロマトグラフィー法", イスタンブール北クリニック, カレ出版, 2016.