競合型ELISAと非競合型ELISAの大きな違いは、競合型ELISAが阻害性抗原を用いるのに対し、非競合型ELISAは阻害性抗原を検出のために用いないことである。

酵素免疫測定法（ELISA）は、抗体、抗原、タンパク質、糖タンパク質など、さまざまなターゲットを検出する免疫測定法である。迅速かつシンプルな方法です。そのため、研究や診断の目的で使用されることが多くなっています。ELISAでは、酵素を使用し、抗原に抗体を特異的に結合させます。反応の起こり方によって、直接法 ELISA、間接法 ELISA、サンドイッチ法 ELISA、抑制法 ELISAの4種類があります。直接法 ELISA、間接法 ELISA、サンドイッチ法 ELISA は非競合型 ELISA で、抑制法 ELISA は完全 ELISA の一種になります。本稿の目的は、競合型ELISAと非競合型ELISAの違いを探ることにある。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. 競合 ELISA とは 3. 非競合 ELISA とは 4. 競合 ELISA と非競合 ELISA の類似点 5. 並べて比較-表形式での競合・非競合 ELISA 6. 総まとめ

競合エリサは何ですか？

競合ELISAは、シグナルの干渉を検出することにより、試料中の抗原の濃度を検出します。ここでは、インヒビター抗原を用いた解析を行います。この手順では、サンプル中の抗原は、選択した参照抗原と競合し、特定量の標識抗体と結合します。さらに、この手順は、過剰な標識抗体とサンプルのインキュベーションから始まります。また、リファレンス抗原は、マルチウェルアッセイプレートに予め封入しておく必要があります。次に、このサンプル混合物を、参照抗原を含むテストストリップに加えます。サンプル中の抗原量に応じて、遊離抗体は参照抗原と結合します。したがって、サンプル抗原が多ければ、リファレンス抗原は少なく検出されます。その結果、弱い信号が出ます。

図01：ELISA

一方、試料に含まれる抗原の数が少ない場合、参照抗原の数が増えれば、抗体が優勢になり、強いシグナルが得られる。競合 ELISA は、抗原量が少ないほど強いシグナルが得られるため、抗原量が非常に少ないサンプルでも高感度なアッセイとなります。

競合 ELISA キットには、標識された抗体の代わりに標識された抗原が使用されるものもあります。ここで、標識抗原とサンプル抗原は、プロ抗体との結合を競合することになる。この場合も、サンプル中の抗原量が少ないと、抗体に結合した標識抗原の量が多くなり、より強いシグナルが得られます。

非競合的エリサは何ですか？

4種類のELISAのうち、3種類は非競合型である。それらは、直接法ELISA、間接法ELISA、サンドイッチELISAである。3つの形式はすべて、ELISAという共通の原理で動作するが、方法にはわずかな違いしかない。

Direct ELISAは、酵素標識一次抗体を使用します。そのため、二次抗体を必要としません。そのため、Direct ELISAは他のタイプのELISAに比べ、より迅速な測定が可能です。一次抗体は、固定化された標的抗原に直接結合します。その結果、酵素と基質の反応が起こり、目に見えるシグナルが生成されます。

図02：サンドイッチELISA

間接法では、直接法と異なり、非標識一次抗体と酵素標識二次抗体を使用します。一次抗体が固定化された抗原に結合すると、二次抗体は一次抗体に結合する。二次抗体中の酵素が抗原と反応し、可視的なシグナルを発生させます。サンドイッチELISAは、直接法および間接法とは異なり、アッセイプレートの壁に抗体を固定化する方法です。

競争的(competitive)と非競合的エリサ（noncompetitive elisa）の共通点

• 免疫吸着測定法には、競合ELISAと非競合ELISAがあります。
• 柔軟性が高く、繊細な技術なのです。
• また、競合型、非競合型ともに酵素結合免疫測定法である。
• また、どちらの方法も酵素-基質反応によるシグナルが発生する。

競争的(competitive)と非競合的エリサ（noncompetitive elisa）の違い

競合型ELISAとは、分析対象の抗原と標識抗原の間に一定量の特異的**抗体が完成することに依存するELISAである。一方、非競合型ELISAでは、分析対象の抗原と参照抗原の間にそのような競合はない。したがって、この点が競合型ELISAと非競合型ELISAの重要な違いである。同様に、競合 ELISA は阻害型 ELISA であり、非競合 ELISA は阻害型 ELISA ではない。したがって、これが競合 ELISA と非競合 ELISA の違いである。

また、競合ELISAは、目的とする抗原が少量である場合の検出にも適しています。繊細な手法である。一方、非競合型ELISAは、試料中の抗原量に依存しない。したがって、これが競合型ELISAと非競合型ELISAの違いである。

以下のインフォグラフィックは、競合型ELISAと非競合型ELISAの違いを説明しています。

概要 - 競争的(competitive) vs. 非競合的エリサ（noncompetitive elisa）

ELISA（酵素免疫吸着測定法）には、主に競合型と非競合型の2種類があります。競合型と非競合型の違いをまとめると、競合型ELISAは、目的の抗原と参照抗原が限られた数の抗体と競合することに依存しています。このため、競合型ELISAは阻害型ELISAとも呼ばれています。一方、非競合型ELISAは、標的抗原と参照抗原の間の競合に依存しないELISAです。分析対象物に対する過剰な標識特異抗体**を使用します。したがって、この点が競合型ELISAと非競合型ELISAの重要な違いである。主な非競合式ELISAには、ダイレクトELISA、インダイレクトELISA、サンドイッチELISAがあります。

引用

1 バイオ・ラッド"ELISA型｜Bio Rad. "Bio、こちらからご覧いただけます。2 "Four ELISA types" Cusabio Life Sciences - your bioscience partner, available here.「4つのELISAタイプ」Cusabio Life Sciences - your bioscience partner, available here.