如何制备稳定的转染细胞系(make stable transfected cell line)
稳定转染是将外源DNA长期导入细胞的过程。稳定转染的细胞通过子代传递外源DNA。因此，要获得稳定转染的细胞系，必须将外源DNA整合到细胞系的基因组中。然而，在非基因组DNA中也可以观察到稳定的遗传。一个成功的、稳定的转染需要有效的DNA递送方法以及在细胞系中对外源DNA的选择方法。稳定转染的细胞系被广泛应用于重组蛋白的生产、基因功能研究、药物发现分析等。
覆盖的关键领域
1.如何**稳定转染细胞系-稳定细胞系产生方案2.如何在细胞系中选择转染DNA-选择稳定转染细胞系
关键词：上位体维持，整合到基因组中，质粒，选择，稳定转染细胞系
如何建立稳定的转染细胞系
转染是一种基因转移的方法，通过化学或非化学方法将遗传物质有意引入宿主细胞。有两种稳定转染的细胞系：
- 稳定细胞系的主要类型是通过将转染的DNA直接整合到宿主的基因组中而产生的。转染的DNA通过同源重组整合到基因组中。
- 另一种产生稳定细胞系的方法是对转染的DNA进行外膜维持。真核载体用于转染未整合到基因组中的DNA。然而，外体DNA的稳定性较低。此外，上位体仅由某些种类维持。稳定转染的细胞系如图1所示。
Figure 1: Stably Transfected Cell Lines
过程
产生稳定细胞系的步骤如下所述。
- 确定最佳选择抗生素浓度的杀伤曲线的生成-细胞受到不断增加的抗生素浓度的影响，以确定一周内杀死所有细胞所需的最小抗生素浓度。
- 用所需质粒结构转染细胞-转染方法因宿主细胞类型而异。脂质体试剂用于转染贴壁细胞系。用电转染或病毒法转染悬浮细胞系。
- 选择并扩增稳定的多克隆菌落-转染48-72小时后，向培养物中添加高、最佳和低浓度的选择性抗生素，以获得稳定转染的细胞系。
细胞系中转染dna的选择
选择标记与转染的DNA共表达以选择成功转染的细胞。标记基因可以位于用于转染宿主细胞的同一载体（cis）或另一载体（trans）上。对新霉素、玉米赤霉素、潮霉素、嘌呤霉素、DHFR等抗生素的耐药性可用于筛选。此外，转染的基因可以用GFP标记。
结论
稳定的细胞系主要是通过将转染的DNA整合到基因组中获得的。此外，在某些宿主组织中，转染DNA的表位维持也可以用来建立长期稳定的细胞系。细胞系中转染DNA的鉴定需要一种筛选方法。
引用
- 发表于 2021-06-30 14:05
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- 分类：科学
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