随机引物和oligo-dT的关键区别在于,随机引物是所有可能的六聚体寡核苷酸序列的混合物,而寡聚dT引物则是由12-18个脱氧胞嘧啶组成的单链。
反转录是一种利用mRNA或任何一种RNA合成cDNA的机制。为了获得cDNA,需要提供逆转录酶和其他必需的成分,尤其是模板和引物。引物是专为扩增靶序列而设计的短DNA序列。随机引物和寡核苷酸引物是两种常见的反转录引物。因此,随机引物或寡-dT引物是逆转录酶启动逆转录所需的短DNA寡核苷酸序列。根据RNA模板的不同,可以从这两种引物中选择合适的引物。
目录
1. 概述和主要区别
2. 什么是随机引物
3. 什么是寡头
4. 随机引物与Oligo-dT的相似性
5. 并列比较-随机引物与寡聚dT的表格形式
6. 摘要
什么是随机引物(random primers)?
随机引物是代表所有可能的六聚体序列的寡核苷酸的混合物。随机引物的引物序列为5´–d(NNNNNN)–3´N=G、A、T或C。因此,随机引物可分别用于DNA聚合酶或逆转录酶扩增单链DNA或RNA。另外,随机引物混合物能够扩增RNA的所有区域,产生cDNA。因此,它产生不同长度的cDNA。
最重要的是,随机引物混合物不显示模板特**。它不能区分mRNA和其他RNA物种。而且,它与样本中的任何一种RNA进行退火。然而,随机引物混合物适用于无poly(A)尾的RNA的反转录,如rRNA、tRNA、非编码RNA、小RNA、原核mRNA等,降解RNA和已知二级结构的RNA。
什么是寡脱氧胸苷酸(oligo dt)?
寡糖dT引物是12-18脱氧胞嘧啶(dT)的延伸。引物序列可表示为5´-d(TTT-TTT-TTT-TTT-TTT-TTT-TTT-3)。用于从含有poly(A)tail的mRNA中制备cDNA。基本上,它作为逆转录酶催化反应的引物。在反转录过程中,大多数真核mRNAs的3′端都有寡聚腺苷酸尾的寡-dT引物退火并启动该过程。
与随机引物不同,oligo-dT引物不适合降解的RNA或缺少poly(A)尾的RNA,包括原核RNA和microRNA。
随机引物(random primers)和寡脱氧胸苷酸(oligo dt)的共同点
- 随机引物和寡核苷酸引物是两种用于反转录和cDNA**的引物。
- 随机引物与寡聚dT引物结合使用可提高cDNA合成的敏感性。
- 它们是单链短核苷酸序列。
随机引物(random primers)和寡脱氧胸苷酸(oligo dt)的区别
随机引物是由一个随机序列组成的短寡核苷酸序列。同时,oligo-dT引物是由12-18个脱氧胞嘧啶组成的短链。所以,这就是随机引物和寡头dT的关键区别。随机引物的序列为5´-d(NNNNNN)–3´N=G、A、T或C,而寡-dT引物的序列为5´-d(TTT-TTT-TTT-TTT-TTT)-3´。因此,我们可以认为这是随机引物和寡头dT的另一个区别。
随机引物不显示模板特**,与任何一种RNA进行退火,寡头dT引物对真核mRNA的多(A)尾具有特**。
下面的信息图总结了随机引物和寡头dT的区别。
总结 - 随机引物(random primers) vs. 寡脱氧胸苷酸(oligo dt)
随机引物和oligo-dT引物是两种用于cDNA合成的引物。随机引物由寡核苷酸的混合物组成,代表所有可能的六聚体序列,而oligo-dT引物是由12到18个脱氧胞嘧啶组成的单链序列。所以,这就是随机引物和寡头dT的关键区别。此外,oligo-dT引物可用于带poly(A)tail的RNA的全长反转录,而随机引物可用于大多数RNA物种的反转录,包括降解RNA、缺少poly(A)尾的RNA和含有二级结构的RNA。因此,随机引物对含有poly(A)tail的真核细胞mRNA无模板特**,而oligo-dT引物对真核细胞mRNA具有特**。
引用
1“反转录装置:美国赛默飞世尔科技公司”,美国赛默飞世尔科技公司,可在这里查阅。