主な違い - 北方式 vs 南方式 vs 西方式 インプリント方式

DNA、RNA、タンパク質の特定の配列を検出することは、分子生物学におけるさまざまな研究に不可欠である。ゲル電気泳動は、DNA、RNA、タンパク質をその大きさに応じて分離する技術です。ゲルプロファイルから、特定のDNA配列、RNA配列、またはタンパク質が、ブロッティングや標識プローブとのハイブリダイゼーションと呼ばれる特殊な技術によって検出されます。ブロッティング法には、サザン法、ノーザン法、ウェスタン法の3種類があります。ノーザンブロッティングとウェスタンブロッティングの主な違いは、試料から検出する分子の種類です。サザンブロッティングはDNA試料から特定のDNA配列を検出する方法です。ノーザンブロッティングはRNA試料から特定のRNA配列を検出する方法です。ウェスタンブロッティングは特定のウェスタンブロッティングは、タンパク質試料から特定のタンパク質を検出する方法です。

Contents1. 概要と主な違い2. 南部シミとは。北方染色とは 4.免疫染色とは 5.並べて比較 - 北方染色 vs. 南方染色 vs. 西方染色 6.まとめ

サザンブロッティングは何ですか？

サザンブロッティング法は、DNAサンプルから特定のDNA配列を同定するために、1975年にE.M. Southernによって開発されました。分子生物学に初めて導入されたブロッティング技術である。DNA中の特定の遺伝子や、DNA中の特定の断片などを検出することができます。詳細は以下の通りです。

1. サンプルよりDNAを単離し、制限酵素で消化した。
2. サンプルはアガロースゲル電気泳動で分離した。
3. ゲルのDN**セグメントをアルカリ溶液で一本鎖に変性させる。
4. 一本鎖DNAは毛細管を通してニトロセルロースフィルター膜に移される。
5. 転送されたDNAは、膜に永久に固定される。
6. 膜に固定化したDNAと標識プローブのハイブリダイゼーション。
7. 結合していないDNAは、洗浄によってメンブレンから洗い流される。
8. X線フィルムを露光し、X線自家蛍光を作成する。

サザンブロッティングは、分子生物学のさまざまな場面で利用されています。RFLP局在化、法医学研究、遺伝子発現におけるDNAメチル化、遺伝性疾患における変異遺伝子の検出、DNAフィンガープリントなどに有用である。

図01：サザンブロッティング技術

ノーザンブロッティングは何ですか？

ノーザンブロッティングは、遺伝子発現を調べるために、試料から特定のRNA配列またはmRNA配列を検出する方法です。この技術は、1979年にAlwine、Kemp、Starkによって開発された。SouthernやWestern blottingの手法とは、いくつかのステップを経ているため異なります。しかし、この技術は、ゲル電気泳動、ブロッティング、特異的なマーカー・プローブとのハイブリダイゼーション、検出によっても実現できる。ノーザンブロッティング技術について以下に述べる。

1. サンプルよりRNAを抽出し、ゲル電気泳動で分離した。
2. RNAはゲルから吸着膜に移され、固定される。
3. cDNAまたはRNAから調製した標識プローブ（プローブはサンプル中の特定の配列に相補的である）でメンブレンを処理する。
4. プローブはメンブレンとインキュベートされ、特定の配列と結合する。
5. 結合していないプローブを洗い落とす。
6. ハイブリッド化された断片は、X線オートラジオグラフィーによって検出される。

ノーザンハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーションしたmRNAの検出と定量化、RNA分解の研究、RNA半減期の評価、RNAスプライシングの検出、遺伝子発現の研究などに重要なツールである。

図02：ノーザンブロッティング法

イムノブロッティング（ウェスタンブロッティング）は何ですか？

イムノブロット法とは、標識抗体を用いて、タンパク質混合物から特定のタンパク質を検出する方法である。したがって、ウェスタンブロットはイムノブロットとも呼ばれています。この技術は1979年にTowbinらによって紹介され、現在では研究室で日常のタンパク質分析に使用されている。手順は以下の通りです。

1. 試料からのタンパク質の抽出
2. ポリアクリルアミドゲル電気泳動で、タンパク質をサイズに応じて分離する
3. エレクトロポレーション法により、分離した分子をPVDF膜やニトロセルロース膜に転写する。
4. 抗体との非特異的**な結合により膜がブロックされる
5. 転写されたタンパク質は、一次抗体（酵素標識抗体）と結合します。
6. 非特異的**に結合した一次抗体を除去するためにメンブレンを洗浄する。
7. 結合した抗体は、基質を添加し、生じた着色沈殿を検出することにより検出される

ウエスタンブロットは、ヒト血清サンプル中の抗HIV抗体の検出に使用されます。ウエスタンブロットはまた、B型肝炎感染の確認検査や狂牛病の確認検査としても使用されます。

図03：イムノブロット

北々南とウェスタンブロッティングの違い

概要 - ノーザン vs. サザン

ブロッティングは、試料から特定のDNA、RNAまたはタンパク質を同定するための特殊な技術である。ノーザンブロッティングはRNA混合物から特定のRNA配列を検出する手法、サザンブロッティングはDNA試料から特定のDNA配列を検出する手法、ウェスタンブロッティングはタンパク質混合物から特定のタンパク質を同定する手法です。プロテインを使用しています。

参考文献1 Gibbons, Jenny."Immunoblotting: an overview of protein transfer", North American Journal of Medical Sciences. mednow Publicati*** & Media Pvt Ltd, March 2014.Web. 27 March 2017. Brown, T. "Southern Blotting", Latest Research Protocols in Immunology. u, US National Library of Medicine, May 2001.Web. 2017.3.27.He, Shan L. "Northern Blotting," Enzymatic Methods. u, U, National Library of Medicine, 2013.Web. 2017年3月27日