グラム染色（グラムステイン）とアシッドファストの違い

バクテリアは非常に小さな微生物です。透明であるため、汚染されていない環境では検出が困難な場合があります。そのため、細菌の検出を容易にするために、さまざまな染色法が開発されてきた。染色法には大きく分けて、単純染色、差分染色、構造染色の3種類があります。差延染色は、さまざまな染色剤を用いて細菌を区別する手法です。鑑別染色としては、グラム染色と耐酸染色が一般的である。グラム染色は、細菌をグラム陽性菌とグラム陰性菌の2つに大きく分類する鑑別染色法である。耐酸性染色は、耐酸性菌（マイコバクテリウムなど）と非耐酸性菌を識別するための鑑別染色である。これが、グラム染色と耐酸染色の大きな違いです。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. グラム染色とは 3. 耐酸性とは 4. グラム染色と耐酸性染色の類似点 5. 並べて比較-グラム染色と耐酸性形態の表 6. まとめ

グラム染色（グラムステイン）は何ですか？

グラム染色は、微生物学において細菌の同定に用いられる重要な分画染色法である。この技術は、1884年にデンマークの細菌学者ハンス・クリスチャン・グラムによって紹介された。グラム染色は、細菌をグラム陽性とグラム陰性の2つに大きく分類し、細菌の分類学的同定に非常に重要である。微生物学者は、細菌の特徴を調べる研究の第一歩として、グラム染色を利用しています。

細菌は、細胞壁によって分類される。グラム陽性菌は細胞壁の厚いペプチドグリカン層からなり、グラム陰性菌は細胞壁の薄いペプチドグリカン層からなる。グラム染色の結果は、細胞壁のペプチドグリカン層の厚さの違いによって判断される。

グラム染色には、主染色剤、媒染剤、脱色剤、対比染色剤の4種類の試薬が使用された。主ステインにはクリスタリンバイオレット、カウンターステインにはサフランレッド、媒染剤にはグラムヨード、脱色剤には95%エタノールを使用した。グラム染色の基本的な手順は次のとおりです。

1. 清潔なスライドグラス上にバクテリアの**耳を用意し、熱固定し、冷却する。
2. スミアにクリスタルバイオレットを1～2分間浸漬する。
3. スミアは、ゆっくりとした水道水の流水ですすぎ、余分な汚れを落とします。
4. グラムのヨウ素を**耳に1分間塗布する。
5. スミアは水道水の緩やかな流水で洗い流されます。
6. スミアは95％アルコールで2～5秒洗浄し、緩やかな流水の水道水ですすぎます。
7. スミアはサフラニンで1分間カウンターステインされる
8. スミアは緩やかな流水の水道水で洗い流し、乾燥させてから顕微鏡で観察します。

グラム染色終了時、グラム陰性菌はピンク色、グラム陽性菌は紫色になっている。

図01：グラム陰性菌とグラム陽性菌

グラム染色の結果は、細胞壁のペプチドグリカン層の厚さに依存する。脱色工程では、グラム陰性菌は薄いペプチドグリカン層を持っているため、主染料と媒染剤がグラム陰性菌から容易に除去され無色化される。グラム陽性菌はペプチドグリカン層が厚いため、一次染色が保持される。グラム陽性菌では、元の染色が残ってしまうため、対染色は効果がない。そのため、グラム陽性菌は染色の最初の色である紫色で確認することができます。カウンターステインはグラム陰性菌を染め、ピックステインであるサフラン色に見えるようになります。したがって、グラム染色は細菌を2つに分類するために用いられ、細菌の同定と特徴づけに大きな価値を持つ。

アシッドファストは何ですか？

耐酸性とは、ある種の細菌の物理的特性で、特に染色工程での酸による脱色に対する抵抗力のことである。これらの生物は、一度染色されると、希酸やエタノールによる脱色処理で一般的に使用される多くの染色プロトコルに抵抗します。そのため、「耐酸性」と呼ばれるようになった。この特性は、細胞壁に含まれる多量のワックス状物質（ミコール酸）によるものである。この検査は、結核菌の同定に不可欠な検査です。

図2：耐酸性マイコバクテリウム

1882年にPaul Ehrlichによって発明された耐酸性のステイン。エールリッヒの耐酸技術は、ジール・ニールセンによって改良され、現在ではより頻繁に使用されている。耐酸性染色には、3種類の試薬が必要です。カーボノールフュージョンが主な着色剤です。脱色剤には酸性アルコールが使用されています。カウンターステインとしてメチレンブルーが使用されています。染色手順は以下の通りです。

1. スライドに固定した標本に一次染色（カルボル・フクシン）を行う（全ての細胞が赤く染まる）。
2. スライドを5分間蒸し焼きにして加熱することで、染色剤を細胞内に適切に追い込みます。
3. 次に、脱色液を加えます（これにより、酸性の高速増殖菌以外のすべての細胞から赤色色素が除去されます）。
4. メチレンブルーをカウンターステインとして添加する（すべての脱色された細菌細胞を着色する）。
5. 酸性の高速菌は赤く、非酸性の高速菌は青く染まる。

グラム染色（グラムステイン）とアシッドファストの共通点

• グラム染色と耐酸染色は、異なる染色方法です。
• どちらの手法も、細菌を2つのカテゴリーに分類する。
• どちらの手法も、2種類のステインと脱色剤を使用します。

グラム染色（グラムステイン）とアシッドファストの違い

概要 - グラム染色（グラムステイン） vs. アシッドファスト

生きている状態の微生物を可視化することは困難です。そのため、その特性を調べるために、生体染色や染色方法が広く用いられている。差延染色は、細菌の同定に用いられる染色法である。グラム染色と耐酸染色は、異なる染色方法です。グラム染色では、細胞壁の厚さによってグラム陰性菌とグラム陽性菌を区別します。耐酸性染色は、細胞壁中のマイコプラズマ酸の量により、耐酸性菌と非耐酸性菌を区別する。これが耐酸染色とグラム染色の違いです。

グラム染色と酸の速さのPDF版をダウンロードする

本記事のPDF版をダウンロードし、オフラインで使用する場合は、引用の指示に従ってください。グラム染色と耐酸性の違いのPDF版はこちらからダウンロードできます。

引用

1 ヤレル、セイガー"耐酸性染色-原理・手順・説明・例"オンライン微生物学ノート.n, 2017年5月8日.網膜のこと。こちらからご覧いただけます 2017.07.20細菌を識別するための識別染色：グラム、耐酸性、エンドスポアー. n., p., n.d. Web.こちらから入手できます 2017.7.20 2 細菌を識別するための染色法の違い：グラム、耐酸性、エンドスポアー. n, p., N.d. Web.