GFP和EGFP的主要区别在于GFP(代表绿色荧光蛋白)是一种在蓝光下表现出明亮绿色荧光的蛋白质,而EGFP(代表增强绿色荧光蛋白)的荧光强度高于GFP。此外,GFP和EGFP的另一个重要区别是GFP是从水母维多利亚海蜇中分离出来的野生型蛋白。但是,EGFP是原野生型的工程变体。
GFP和EGFP是两种作为内部发色团的蛋白质。它们不需要任何辅助酶/底物、辅助因子或基因产物来显示其颜色。因此,二者在分子生物学中都被用作基因表达的报告者。
1.什么是GFP–定义、结构、重要性2.EGFP是什么?定义、结构、重要性3.GFP和EGFP之间的相似之处是什么?共同特征概述4.GFP和EGFP之间的区别是什么?关键差异比较
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绿色荧光蛋白(GFP)是一种在蓝光或紫外光下呈绿色发光的蛋白质。它自然出现在水母,Aequorea Victoria中。GFP由238个氨基酸组成。GFP的大小为26.9kda。GFP不含任何辅助分子,具有固有的荧光特性,是分子生物学的有力工具。荧光是由于蛋白质相邻氨基酸的共价重排。蛋白质折叠后,主链原子Ser65、Tyr66和Gly67在O2存在下形成高度共轭的平面对羟基苄叉内咪唑啉酮生色团。晶体结构研究表明,发色团堆积在晶体的核心内β-分子的桶状结构保护它免受顺磁氧、水偶极子或顺反异构化的猝灭。此外,发色团与邻近分子的非共价相互作用增强了其光谱性质。
Figure 1: Ribbon Representation of GFP and Fluorophore
GFP可以在转基因修饰过程中被导入生物体。它也可以代代相传。野生型GFP的主要缺点是在生理温度(如37℃)下的低效率折叠导致蛋白质在细胞成像中的有效性降低°C、 掉荧光信号。另外,GFP在宿主细胞内的成熟速度较慢,但趋向于**。由于存在两种不同形式的发色团,可以观察到两个激发峰。然而,蛋白质工程通过引入野生型GFP的变体解决了大部分问题。
EGFP(enhanced green fluorescence protein,增强型绿色荧光蛋白)是野生型GFP的一个变种,相对于GFP具有更高的荧光强度。它是最早也是最重要的GFP变体之一。F64L和S65T这两个突变在37℃产生了折叠效率更高的EGFP°C.有趣的是,由于S65T对395nm峰的抑制,EGFP在~490nm处有一个单一的激发峰,因为它调节附近Glu222的电离状态。另一方面,F64L提高了折叠效率在37°C.重要的是,EGFP的密码子序列优化了在哺乳动物细胞中的表达。
Figure 2: EGFP Expression
绿色荧光蛋白:一种野生型蛋白质,在蓝光或紫外光下呈现绿色荧光,自然存在于水母Aeqourea Victoria中
绿色荧光蛋白:野生型绿色荧光蛋白的一种变体,具有比绿色荧光蛋白更高的发射强度
绿色荧光蛋白
增强型绿色荧光蛋白
GFP:野生型
EGFP:突变体
GFP:苯丙氨酸
EGFP:亮氨酸
GFP:丝氨酸
EGFP:苏氨酸
GFP:亮绿色
EGFP:亮绿色
GFP:两个峰(395 nm和490nm)
EGFP:单峰(490 nm)
GFP:低
EGFP:高
绿色荧光蛋白(GFP)是一种野生型蛋白质,当暴露于蓝光或紫外光下时,会呈现亮绿色荧光。EGFP是GFP的一种变体,与GFP相比具有更高的荧光强度。因此,GFP和EGFP之间的主要区别在于每种蛋白质发出的绿色荧光的强度。
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