RT-PCR(アールティーピーシーアール)とキューピーアールカンパニー（QPCR）の違い

ポリメラーゼ連鎖反応は、試験管内でDNAの特定領域を増幅する技術である。1983年にカリー・マリスがこの技術を発明したおかげで、科学者は研究目的で何千から何百万もの特定のDN**セグメントを複製することができるようになったのです。現在では、臨床や研究室で広く応用されている一般的でルーチンな技術となっています。RT-PCR, set PCR, multiplex PCR, Q-PCR, RT-QPCR などの伝統的な PCR 技術がある。 RT-PCR と Q-PCR は PCR の重要な変種である。 RT-PCR と Q-PCR の大きな違いは、 RT-PCR が RNA から相補的 DNA (cDNA) 転写物を生成して遺伝子発現を検出するのに、Q-PCR は、RNA から相補的な DNA (cDNA) 転写物を生成して遺伝子発現を検出するのに、用いられるということである。PCRでは、蛍光色素を用いてPCR産物をリアルタイムに定量化する。

目次1. 概要と主な違い2. RT-PCRとは3. QPCRとは4. 並列比較 - RT PCR vs QPCR5. まとめ

RT-PCR(アールティーピーシーアール)は何ですか？

逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）は、RNAの発現を検出するために用いられるPCRの変種である。組織におけるmRNAの発現を検出するために非常に重要な方法である。RT-PCR法は、試料の出発物質がRNAの場合に使用される。このステップは逆転写酵素によって行われ、逆転写として知られるプロセスである。次に、新たに合成されたcDNAを従来のPCR法で増幅する。

RT-PCRは、比較的少量のRNAサンプルを必要とする高感度な技術であり、特にヒト免疫不全ウイルスやC型肝炎ウイルスなどのRNAウイルス種の診断や定量によく用いられている。

図01：RT PCR法

株式会社qpcr (qpcr)は何ですか？

定量的PCR（qpr）とは、PCR産物を定量的に検出するためのPCRの変種である。リアルタイムPCR装置を用いてリアルタイムに増幅を検出するため、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応とも呼ばれる。qPCRは、増幅と真の定量をワンステップで行えるという興味深い特徴をもっています。qprは、PCR反応中に蛍光色素でPCR産物を標識し、最終的に直接定量する手法であるため、ゲル電気泳動による検出は必要ない。PCR産物が蓄積されると、蛍光シグナルも蓄積され、リアルタイム装置で測定される。qPCRはRT-PCRと組み合わせることができる。RT-QPCRまたはQRT-PCRと呼ばれ、細胞や組織中のRNA量を検出するための最も強力で高感度かつ定量的な方法と考えられている。

SYBR-Green法は、SYBR-Greenという蛍光色素を用いて行い、色素と結合して二本鎖DNAを生成することで増幅を検出する方法である。図02に示すように、増幅を行う。どちらの方法も、増幅の進行状況をモニターし、生成物の量をリアルタイムで報告することが可能です。

リアルタイムPCRは、遺伝子発現定量、マイクロRNA・ノンコーディングRNA解析、SNPジェノタイピング、コピー数変動検出、希少変異検出、GMO検出、感染症検出など幅広い応用が可能である。

図02：定量的PCR法

RT-PCR(アールティーピーシーアール)とキューピーアールカンパニー（QPCR）の違い

概要 - RT-PCR(アールティーピーシーアール) vs. キューピーアールカンパニー（QPCR）

RT-PCRとQPCRは、従来のPCRの2つのバージョンです。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）技術はmRNAサンプルに対して行われ、逆転写とcDNAの生成によって駆動されます。 QPCRは蛍光色素または標識プローブを使ってリアルタイムPCRサーマルループでPCR産物を定量するために使用されます。増幅法として RT-PCR が、定量法として QPCR が一般的に用いら れるが、QPCR においては PCR 産物の量を試料から発せられる 蛍光信号で示す。ここがRT-PCRとQPCRの違いです。

R 参考文献：1 Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo and GK Agrawal. "Real-time PCR: a revolutionary advance in gene detection and expression analysis.", 現代のゲノミクス。ビアンチ・サイエンス・パブリッシャーズ・リミテッド、2007年6月。Web. 2017年4月3日。ゼカ、フィヨルド、ケイトリン・ヴァン・デル・ヘイデン、エルス・デスメット、クロード・A・カヴェリエ、ピエトロ・メスダグ、ジョー・ヴァン・デル・サンプル。「RT-qPCRによるFFPEサンプルの遺伝子発現解析」 Nature News.Nature Publishing Group、2016年2月22日。Web. 2017年4月3日。Overberg, L., A. Giulietti, D. Valkex, B. Ten Dalon, R. Bouillon and C. Mathew.リアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応によるサイトカイン遺伝子発現の定量〉、バイオ分子技術誌：JBT. バイオ分子資源施設協会, 2003年3月.Web. 2017年4月3日。