クロマティックフォーカシングと等電点フォーカシングの大きな違いは、クロマティックフォーカシングがイオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー法であるのに対し、等電点フォーカシングはpH勾配ゲルを固定化した電気泳動法である点である。

タンパク質を等電点に基づいて分離する方法として、色収差と等電点収差があります。クロマトグラフィーフォーカシングと等電点フォーカシングは、どちらも非常に高い分解能を持っています。クロマトグラフィーフォーカシングは高分解能のカラムクロマトグラフィー法であり、等電点フォーカシングは電気泳動分離法である。また、クロマトグラフィーフォーカシングは電場を必要としないが、等電点フォーカシングは電場を必要とする。

カタログ

1. 概要と主な違い 2. クロマチックフォーカシングとは 3. 等電点とは 4. クロマチックフォーカシングと等電点との共通点 5. 横並び比較 - クロマチックフォーカシングと等電点との表形式 6. まとめ

クロマトフォーカシングは何ですか？

クロマトグラフィーフォーカシングは、タンパク質の等電点の違いを利用して分離する高効率な溶出クロマトグラフィー法である。イオン交換樹脂カラムと自社開発のpHグラジエントを使用しています。等電点収束とは異なり、クロマトグラフィー収束は電場を必要としない。クロマトグラフィーのフォーカシングは、わずか0.02 pH単位の違いでも、類似性の高い分子を分離できる強力な精製技術である。そのため、クロマティックフォーカシングは、非常に類似した成分を分離する際の最終研磨工程として最適です。

クロマトグラフィーフォーカシング法では、試料を出発バッファーと混合してカラムに適用する。等電点以上のpHを持つタンパク質は負に帯電しており、カラムの上部付近に留まり、等電点以下のpHを持つ他のタンパク質は下方に移動する。等電点の高いタンパク質が先に溶出し、等電点の低いタンパク質は最後にカラムから溶出します。この方法は、タンパク質の沈殿やpHグラジエントの直線性などの要因に影響されます。

等電点は何ですか？

等電点収束は、異なる分子を等電点に基づいて分離する技術である。エレクトロフォーカシングとも呼ばれる。この技術は、ゲル中のタンパク質の分離によく使われます。等電点収束では、アクリルアミドゲルマトリックスにpH勾配をつけたIPG（immobilised pH gradient）ゲルに試料を添加する。タンパク質は等電点のpH領域が見つかるまでカソードに向かって移動する。タンパク質が正味の電荷を持たないpHに達すると、移動が停止し、静止バンドが形成される。この場合も、各タンパク質はpH勾配上の等電点に対応する点にバンドを持つ。

図01：等電点集光

等電点収束は、双方向性ゲル電気泳動の最初のステップである。この技術は、まず等電点集束によるタンパク質の分離、等電点による分離、そしてSDS-PAGEによる分子量分離が行われる。

クロマトフォーカシングと等電点の共通点

• 高分解能の方法としては、色収差フォーカスと等電点フォーカスがある。
• どちらもタンパク質の等電点を基準にしています。
• これらの技術は、pH勾配を利用したものです。
• どちらの方法も、ヒトのヘモグロビンの変異を特徴づけるのに有効である。
• 0.02pH単位で異なるπ値の分子を区別することができる。

クロマトフォーカシングと等電点の違い

クロマトグラフィーフォーカシングは、タンパク質を等電点に基づいて分離する高分解能のカラムクロマトグラフィー技術です。一方、等電点収束は、キャピラリー内に形成されたpH勾配に沿って電場をかけ、等電点によってタンパク質を分離する電気泳動法である。これが、ステイン・フォーカスと等電点フォーカスの決定的な違いなんですね。

また、色収差と等電点収差の違いは、色収差は電場を必要としないのに対し、等電点収差は電場を必要とすることです。

概要 - クロマトフォーカシング vs. 等電点

クロマトグラフィーフォーカシングと等電点フォーカシングは、分子、特に非常に類似した分子に対して高い分解能を持つ類似の技術である。クロマトグラフィーフォーカシングは高分解能のカラムクロマトグラフィー技術であり、等電点フォーカシングは電気泳動法である。等電点収束とは異なり、クロマトグラフィー収束は電場を必要としない。そこで、本稿では、クロマトグラフィーフォーカシングと等電点フォーカシングの違いについてまとめた。

引用

1 "Chromatic focusing: principles and methods", Sigma, 2 "Isoelectric focusing". english wikipedia.Org 2020.