溫暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的區別

關鍵區別-熱胰蛋白酶和冷胰蛋白酶

在動物細胞培養中，熱胰蛋白酶解聚和冷胰蛋白酶解聚是兩種常用的方法。顧名思義，溫熱胰蛋白酶和冷胰蛋白酶之間的關鍵區別取決於添加胰蛋白酶進行細胞分解的溫度。在較高溫度條件下（36.5–37℃）進行熱胰蛋白酶化，而在低溫條件下進行冷胰蛋白酶化。

在動物細胞原代培養過程中，主要採用了三種方法，並已被證明是成功的。這三種方法包括機械分離細胞、酶解細胞和原代外植體技術。細胞的酶解聚合導致細胞分離，它是由蛋白質降解酶胰蛋白酶完成的。因此，這個過程被稱為胰蛋白酶化。胰蛋白酶解可在兩種不同的條件下進行，即熱胰蛋白酶化和冷胰蛋白酶化。溫熱胰蛋白酶法是在36.5–37℃的溫度下用胰蛋白酶處理細胞的方法。冷胰蛋白酶處理是在較冷的條件下進行的胰蛋白酶處理過程，最好是在保持極低溫度的冰中進行。

什麼是溫胰蛋白酶(warm trypsinization)？

胰蛋白酶化可以分解細胞成分，以分離細胞，產生原代細胞培養物。胰蛋白酶是一種蛋白質降解酶，用於胰蛋白酶化的酶混合物可以是粗提取物，也可以是純化產品。粗提物據說在蛋白質分解和細胞解體方面更有效，因為它含有其他降解酶。

溫胰蛋白酶解是最常用的酶解方法，在較高的溫度條件下發生細胞分裂。在用胰蛋白酶處理之前，需要的組織被切成小塊。它有助於簡化分解過程。切碎的組織然後在一種被稱為解剖基礎鹽培養基的特殊介質中清洗。

洗滌步驟完成後，將細胞轉化為含有活性酶（胰蛋白酶）的燒瓶。由於這項技術意味著一個溫暖的胰蛋白酶程序，胰蛋白酶放置在37℃左右的溫度下大約4小時。

溫暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的區別

圖01：胰蛋白酶

使用離心方法混合和攪拌內容物，以簡化協議並加快分解過程。一旦達到建議的時間，細胞就可以從上清液中提取出來。從上清液中提取的細胞然後在特定的溫度和時間下培養。

什麼是冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)？

冷胰蛋白酶解是在低溫條件下發生的另一種胰蛋白酶化。在這項技術中，被切碎和清洗的細胞被放在冰上的小瓶裡，然後用胰蛋白酶浸泡。浸泡的時間要長得多，大約6到24小時。

浸泡程序完成後，從細胞裂解液中除去胰蛋白酶，然後將組織塊進一步在37℃下培養20-30分鐘。細胞的分解是通過反覆吸取組織混合物來實現的。這將使細胞從膜上分離出來，進入上清液。一旦細胞進入上清液中，它們就在所需的溫度和時間段進行培養和生長。

冷胰蛋白酶法有幾個優點

細胞損傷最小化，活細胞產量更高。不使用離心步驟可使細胞損傷最小化。
非常方便的方法。
不那麼辛苦。

冷胰蛋白酶法的主要侷限性是一次不能大量使用。

溫暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的共同點

無論是熱胰蛋白酶還是冷胰蛋白酶都使用胰蛋白酶來分解細胞。
在細胞培養過程中，熱胰蛋白酶和冷胰蛋白酶處理都用於細胞的分解。
在溫熱和冷胰蛋白酶處理過程中，細胞來自上清液。

溫暖的(warm)和冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)的區別

溫熱胰蛋白酶法與冷胰蛋白酶法
溫胰蛋白酶法是在36.5–37 0的溫度下用胰蛋白酶處理細胞的方法。	冷胰蛋白酶化是胰蛋白酶處理的過程，在較冷的條件下進行，最好是在保持極低溫度的冰中進行。
協議
切碎的紙巾片在整個過程中持續保持在37攝氏度。	切碎的紙巾最初保持在冰冷的溫度下，然後保持在37度。
溫度
在36.5–37.0之間發生熱胰蛋白酶化	冷胰蛋白酶化發生在冰冷的溫度下。
消耗的時間
整個溫熱胰蛋白酶消化過程所需的時間較少（約4小時）。	冷胰蛋白酶化需要更長的時間（大約6-24小時）。
活細胞產量
熱胰蛋白酶化率低。	高低溫胰蛋白酶。
離心法的使用
在溫熱胰蛋白酶解聚時需要離心。	冷胰蛋白酶解不需要離心。
胰蛋白酶化初始組織量
大量組織可用於溫熱胰蛋白酶化。	少量組織可用於冷胰蛋白酶化。
細胞損傷
由於在溫熱胰蛋白酶消化中離心分離而高。	由於冷胰蛋白酶化而減少。

總結 - 溫暖的(warm) vs. 冷胰蛋白酶化(cold trypsinization)

胰蛋白酶化是指在細胞培養過程中，利用蛋白質降解酶胰蛋白酶分解和製備原代細胞培養物的方法。根據手術過程中使用的溫度，有兩種主要的胰蛋白酶化技術。它們是冷熱胰蛋白酶。熱胰蛋白酶解在37℃下進行，而冷胰蛋白酶化在冰冷的條件下進行。雖然冷胰蛋白酶化需要更長的時間來完成，但據說它有更高的活細胞產量。這是因為在冷胰蛋白酶法中細胞損傷最小化，因為它不使用劇烈的離心步驟。這就是熱胰蛋白酶和冷胰蛋白酶的區別。