雙鏈嵌合熒光染色(sybr green)和水解探針(taqman)的區別
sybrgreen和Taqman是檢測或觀察實時PCR擴增過程的兩種方法。SYBR-Green是一種基於**核酸染色染料的方法，Taqman是基於水解探針的方法。這兩種技術都是為了在PCR過程中產生熒光而設計的，這使得實時PCR機器能夠“實時”監控反應。SYBR-Green法是使用一種叫做SYBR-Green的熒光染料，通過將染料與產生的雙鏈DNA結合來檢測擴增。Taqman使用雙標記探針進行，通過Taq聚合酶降解探針和熒光團釋放來檢測擴增。這就是SYBR Green和Taqman之間的關鍵區別。
內容1。概述和主要區別2。什麼是SYBR Green3。什麼是Taqman4。並列比較——SYBR Green vs Taqman5。摘要
什麼是雙鏈嵌合熒光染色(sybr green)？
SYBR綠是一種熒光染料，在分子生物學中用來染色核酸，特別是雙鏈DNA。採用SYBR-Green法對實時PCR過程中的PCR產物進行定量分析。一旦與DNA結合，產生的DNA染料複合物吸收藍光併發出強烈的綠光。這是由於染料分子與雙鏈DNA結合時發生的結構變化引起的。當PCR產生越來越多的DNA時，更多的染料分子與DNA結合，產生更多的熒光。因此，熒光強度隨著PCR產物的積累而增加。因此，可以用SYBR綠色熒光檢測法定量檢測PCR產物的含量。
SYBR綠色染料也可用於細胞術和熒光顯微鏡中的DNA標記。溴化乙錠是一種致癌染料，在凝膠電泳顯示DNA時存在處理問題，已成功地用SYBR綠取代了溴化乙錠。
SYBR-green法各有優缺點。該方法靈敏度高，成本低，使用方便。然而，由於它能與任何雙鏈DNA結合，非特**結合會導致PCR產物的過度定量。
圖01:SYBR綠色技術
什麼是水解探針(taqman)？
Taqman是一種替代SYBR-Green的實時PCR檢測方法。這種方法依賴於Taq聚合酶5'-3'核酸外切酶活性，在新鏈延伸和熒光團釋放過程中降解探針。該方法以探針水解為基礎，採用雙標記探針。探針是熒光標記的DNA寡核苷酸，5'端有一個熒光報告分子（熒光團），3'端有一個猝滅分子。它們被設計成與底漆退火相反一側的單股模板結合。Taq聚合酶向引物中加入核苷酸，並向雙標記探針延伸新鏈。一旦Taq聚合酶遇到探針，Taq聚合酶的核酸外切酶作用激活並降解探針。一旦完成了新鏈的合成，探針就會完全降解並釋放熒光團。熒光團的釋放產生熒光。熒光猝滅分子有效地熄滅發射的光，併產生用於定量PCR產物的輸出。熒光團的釋放與PCR產物的數量成正比。因此，可以通過Taqman方法輕鬆地進行量化。
圖02:Taqman方法
Taqman方法用於實時PCR、基因表達定量、遺傳多態性檢測、染色體DNA缺失定量、細菌鑑定、微陣列分析驗證、SNP基因分型等。
雙鏈嵌合熒光染色(sybr green)和水解探針(taqman)的區別
| 賽博綠vs塔克曼 | |
| SYBR綠是基於DNA結合染料。 | Taqman依賴於雜交探針和Taq聚合酶的5′至3′核酸外切酶活性。 |
| 熒光標記探針 | |
| 不需要熒光標記探針。 | 需要雙標記探頭。 |
| 多重基因分析 | |
| 它不能用於多重基因靶點。 | 它可以用於多重基因靶點。 |
| 成本 | |
| 這個比較便宜。 | 這個比較貴。 |
| 特** | |
| 它的特**較低，可與任何雙鏈DNA結合 | 由於探針能檢測到特定的擴增產物，因此它們具有高度的特**。 |
| 有效性 | |
| 這是不太有效的。 | 這是非常有效的。 |
| 應用 | |
| 用於實時PCR、瓊脂糖凝膠可視化、DNA標記等。 | 這被用於實時PCR、基因表達定量、基因多態性檢測等。 |
總結 - 雙鏈嵌合熒光染色(sybr green) vs. 水解探針(taqman)
Taqman和SYBR-green是實時定量PCR的兩種方法。這兩種方法都能有效地定量PCR產物並依賴於熒光發射。Taqman方法使用雙標記探針檢測累積的DNA，而SYBR-Green方法使用熒光染料。這兩種方法在分子生物學中也有不同的應用。
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