如何胰蛋白酶在细胞培养中起作用(trypsin work in cell culture)
胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，在肽的C末端裂解赖氨酸和精氨酸残基。它是细胞培养中应用最广泛的一种酶，用于从培养容器表面释放粘附细胞。胰蛋白酶很容易被培养的大多数细胞所耐受。在培养基中加入血清可以很容易地中和其活性。胰蛋白酶的这两个特性促进了它们在细胞培养中的应用。一般情况下，胰蛋白酶与EDTA一起添加到细胞培养物中。本文介绍了胰蛋白酶在细胞培养中的作用。
覆盖的关键领域
1.什么是胰蛋白酶-定义、特征、功能2.胰蛋白酶在细胞培养中的作用-胰蛋白酶在细胞培养中的作用
关键词：粘附蛋白、细胞粘附、消化酶、胰蛋白酶、胰蛋白酶、胰蛋白酶化
什么是胰蛋白酶(trypsin)？
胰蛋白酶是一种消化酶，能分解许多脊椎动物消化系统中的蛋白质。它存在于胰液中。胰蛋白酶分解肽羧基末端的赖氨酸和精氨酸残基。然而，当这两种氨基酸后跟脯氨酸时，它不会将它们裂解。胰蛋白酶的活性被用于许多生物技术过程中，胰蛋白酶的作用被称为胰蛋白酶化或胰蛋白酶水解。胰蛋白酶的晶体结构如图1所示。
Figure 1: Trypsin
胰蛋白酶作用的最佳pH值为7.6-8.5。通常，在胰蛋白酶测定中，苯酚红用于监测上述pH范围。苯酚红在这个pH范围内呈现粉红色。胰蛋白酶的测定在干冰上进行。
胰蛋白酶在细胞培养中是如何工作的
质膜上的蛋白质负责各种功能，这些功能对于维持细胞的正常生理活动是必不可少的。一些质膜蛋白，如钙粘蛋白家族是作为锚蛋白的粘附蛋白，将细胞骨架蛋白与细胞外基质连接起来。这有助于细胞粘附和细胞迁移。血浆膜内的粘附蛋白如图2所示。
Figure 2: Cell Adhesive Proteins
在细胞培养中，胰蛋白酶可以被添加到培养基中，通过消化粘附的蛋白质将粘附的细胞从培养容器表面释放出来。胰蛋白酶也通过消化粘附蛋白从**物中释放细胞。EDTA也与胰蛋白酶一起加入到细胞培养中，以螯合培养基中的二价离子。钙和镁离子可抑制胰蛋白酶的作用。最终，胰蛋白酶有助于从细胞培养中获得单个细胞，促进细胞的下游加工。
结论
胰蛋白酶是一种消化肽的光解酶。胰蛋白酶广泛应用于细胞培养中，通过消化粘附蛋白，将细胞释放到培养基中，从而获得单个细胞。
引用
1.“哺乳动物细胞继代培养过程中胰蛋白酶诱导的蛋白质组改变。” 生物医学科学杂志，生物医学中心，2010年5月11日，可在这里获得。
- 发表于 2021-06-30 13:44
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- 分类：科学
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