如何蛋白质印迹法(western blotting work)

westernblotting是一种分子生物学技术，用于检测样本中的特定蛋白质。它使用SDS-PAGE根据蛋白质的大小来分离蛋白质，然后这些分离的蛋白质被转移到膜中。这项技术使用特定的一级抗体在印迹中标记特定的蛋白质。用报告蛋白标记的二级抗体检测用一级抗体标记的蛋白。...

westernblotting是一种分子生物学技术，用于检测样本中的特定蛋白质。它使用SDS-PAGE根据蛋白质的大小来分离蛋白质，然后这些分离的蛋白质被转移到膜中。这项技术使用特定的一级抗体在印迹中标记特定的蛋白质。用报告蛋白标记的二级抗体检测用一级抗体标记的蛋白。

覆盖的关键领域

1.什么是Western Blotting–定义、事实、应用2.Western Blotting是如何工作的–Western Blotting的过程

关键词：显色，硝化纤维素膜，一级抗体，二级抗体，westernblotting

什么是蛋白质印迹(western blotting)？

westernblotting是一种用于检测样本**定蛋白质的杂交技术。它也被称为免疫印迹，因为该技术使用抗体来标记感兴趣的蛋白质和检测抗体标记的蛋白质。

Figure 1: Western Blot

westernblotting最早由Towbin于1979年开发，目前已作为蛋白质分析的常规技术。

西方吸墨剂是如何起作用的

westernblotting主要用于检测样本中的特定蛋白质。Western印迹技术的步骤如下所述。

SDS-PAGE–通过SDS-PAGE根据蛋白质样品的大小进行分离。
将蛋白质转移到膜上–将大小分级的蛋白质转移到硝化纤维素或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。这种转移所涉及的技术是扩散转移。
阻断非特**位点-膜上未被占据的位点被阻断以阻止蛋白质的非特**结合。脱脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）可用于此目的。
一级抗体孵育-用一级抗体溶液孵育封闭的膜。这些一级抗体与膜上的特定蛋白质结合。
二级抗体孵育-膜与二级抗体孵育，二级抗体与一级抗体结合。二级抗体与报告蛋白结合。这些报告蛋白可以是生物素、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。
通过显色法检测蛋白质-结合酶与底物反应生成有色碱性磷酸酶，将BCIP转化为蓝色产物，辣根过氧化物酶转化鲁米诺，发出发光。

Figure 2: Western Blotting – Procedure

结论

westernblotting是一种杂交技术，用于检测样本**定蛋白质的存在。它使用SDS-PAGE根据蛋白质的大小和与一级抗体的结合来分离蛋白质，在显色过程中二级抗体可以识别这些蛋白质。

引用

1.“蛋白质印迹的基本原理，蛋白质印迹的工作原理。” 博斯特，这里有。

发表于 2021-06-30 14:12
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分类：科学

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