如何南方印迹法(southern blotting work)
Southern杂交是一种用于检测样本**定DN**段的技术。印迹技术涉及通过凝胶电泳根据大小分离DN**段，将大小分级的DNA样品转移到滤膜上，用标记的序列特**探针杂交特定的DN**段，并检测标记的条带。
除了在样品中鉴定特定DNA外，还可以通过Southern杂交确定特定类型DNA的大小和丰度。本文介绍了南方吸墨术的过程。
覆盖的关键领域
1.什么是Southern Blotting？定义、原理、应用2.Southern Blotting是如何工作的？Southern Blotting的过程
关键词：DNA，凝胶电泳，杂交探针，尼龙膜，限制性消化，Southern印迹
什么是南方杂交(southern blotting)？
Southern杂交是一种用于鉴定样本**定DNA的杂交技术。这项技术最早是由爱德华M。这一过程确定了样本**定DNA序列的DNA序列、大小和丰度。
Southern印迹膜如图1所示。
Figure 1: Southern Blotting Membrane
southern印迹技术的应用
Southern印迹的应用如下。
- 检测特定的DN**段
- 分离特定的DN**段
- 识别突变和基因重排
- RFLP分析（限制性片段长度多态性）
- 识别遗传疾病
- 识别传染源
- 亲子鉴定
- 用DNA指纹识别罪犯
南方吸墨纸是怎么工作的
Southern印迹法是通过凝胶电泳分离DN**段，将其转移到膜上，与标记的序列特**探针杂交，并检测标记的条带。Southern印迹的步骤如下所述。
- DNA消化-DNA样本被限制性内切酶消化，得到DN**段，这些片段通过PCR扩增。
- 凝胶电泳-DN**段通过凝胶电泳进行大小分级。
- 变性-将含有分离DNA的凝胶浸泡在NaOH或HCl中以变性双链DNA。
- 印迹——凝胶中的DN**段通过一种叫做印迹的过程转移到带正电的尼龙膜上。
- 烘烤和封闭——将带有DN**段的吸墨纸烘烤，将DNA固定在膜上。然后，用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白使未被占据的结合位点饱和。
- 与标记探针杂交-用标记探针处理DNA结合膜，标记探针包含与感兴趣的DN**段互补的核苷酸序列。杂交探针的长度一般为100-500bp，并用放射性核苷酸标记。
- 放射自显影显示-探针结合膜在放射自显影下显示，以获得感兴趣的DN**段的模式。
Figure 2: Southern Blotting
Southern印迹的整个过程如图2所示。
结论
Southern杂交是一种用于鉴定样本**定DNA序列的杂交技术。在这个过程中，DNA样本被限制性内切酶分离，混合物在凝胶上运行。然后，凝胶中的条带图案被转移到尼龙膜上，并与标记探针杂交，从而检测出感兴趣的片段。
引用
- 发表于 2021-06-30 14:10
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- 分类：科学
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