什么是肽的纯化？(peptide purification?)
肽是由氨基酸组成的小聚合物。许多是具有生物活性的激素、毒素，或具有其他能力。这种化合物经常被用于生物、医学和化学研究。当它们的数量连接在一起时，它们还可以作为蛋白质的构成部分。肽纯化是一种用于纯化大量所需肽的技术，或帮助分离从蛋白质消化中产生的肽。
肽的纯化是通过使用色谱技术来完成的，这是一种分离与物理基质不同结合的化合物的方法。高压液相色谱法（HPLC）通常用于肽的纯化。肽或多肽被应用于混合溶剂中，当它们在高压下被泵过小珠子柱时，混合溶剂随时间变化。不同的肽在不同的时间点洗脱，并由一个监测器（通常是紫外分光光度计）检测。
在进行多肽研究时，感兴趣的物质往往很罕见，无法从化学公司购买。如果所需多肽的结构是已知的，那么通过多肽合成法进行化学制备往往比从天然来源中分离出该化合物要容易。天然产品的分离是众所周知的困难。合成的多肽一般通过HPLC纯化。
对于不是化学家的独立研究人员来说，这种化学合成可能是令人生畏的。通常，这项任务被外包给专门从事这些技术的多肽合成公司。这可能比在实验室里从头开始建立这个系统更经济。肽公司可以根据研究者的需要制作定制的肽。
多肽纯化的另一个原因是当研究人员纯化了一种蛋白质并试图确定其身份时。他或她可以将蛋白质降解为多肽片段，通过纯化分离这些片段，并在多肽从柱子上洗脱时用质谱仪检测它们的片段模式。这种技术被称为LC-MS，是液相色谱-质谱法的简称。它给出了片段的分子量和氨基酸组成，如果之前已经确定了类似或相同的蛋白质，往往能够识别这些蛋白质。
许多研究人员使用具有新特征的肽，如非天然氨基酸，试图找到具有不寻常生物活性的肽。有一个完整的领域被称为拟肽学，专门研究这种新型肽。通常，计算机生成的序列被设计出来，并合成了一个包含一系列非典型肽的肽库。肽的纯化被用来分离这个库的各个成员，以提供纯肽来测试生物活性。这一策略已经成功地产生了至少一种新的可商业化的药物。
许多具有生物活性的多肽都有医疗用途。商业上使用的化合物，如胰岛素，通常由重组DNA过表达系统产生大量的所需化合物。通常，多肽经过基因工程设计，通过在其前端添加某种标签来促进纯化。这允许使用亲和色谱法来纯化多肽。
在这种色谱法中，标签是一种化合物，如组氨酸，它将与珠子的基质结合，如镍，选择其结合标签的能力。不需要的蛋白质和多肽一般会通过色谱柱而不被结合。专门设计的多肽通常与柱子强烈结合。污染的蛋白质和多肽被洗掉后，所需的多肽被一种竞争性的化合物洗出，与基质结合。这样就有了相当纯的所需肽的制备，并且可以通过裂解去除标签。
- 发表于 2022-02-10 10:46
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- 分类：科学
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