關鍵區別——phusion與taq聚合酶
DNA聚合酶是分子生物學技術中廣泛使用的酶,在所有進行DNA複製的生物體中也自然存在。它們是複製過程中涉及的關鍵聚合酶。DNA聚合酶能夠在DNA鏈的3'末端添加核苷酸,從而引起新鏈的延伸。目前,由於分子生物學在疾病診斷和工業應用方面的發展,製備具有多種有益性質的聚合酶具有重要意義。這提高了方法的準確性,使之成為一種更快速的技術。Phusion和Taq聚合酶是兩種商業化生產的耐熱聚合酶酶,用於特殊的分子應用。Phusion是從糠秕熱球菌中分離出的一種DNA聚合酶,主要用於克隆實驗以提高保真度。Taq-DNA聚合酶是聚合酶鏈反應(PCR)中使用的標準DNA聚合酶,它是從耐熱細菌Thermus aquaticus中分離出來的。這兩種酶的關鍵區別在於來源微生物。Phusion是從極端微生物糠秕熱球菌中分離出來的,而Taq聚合酶是從嗜熱菌Thermus aquaticus中分離出來的。
目錄
1. 概述和主要區別
2. Phusion是什麼
3. 什麼是Taq聚合酶
4. Phusion和Taq聚合酶的相似性
5. 聚合酶鏈式比對
6. 摘要
什麼是普希(phusion)?
Phusion-DNA聚合酶是一種新型的聚合酶,是從極端古生菌糠秕焦球菌(pyrococcusfuriosus)中分離得到的一種新型聚合酶。這些微生物存在於極高的溫度條件下,從而使聚合酶成為一種高度熱穩定的聚合酶。Phusion聚合酶比傳統的耐熱聚合酶Taq聚合酶獲得了極高的保真度。Phusion聚合酶能夠擴增出高達7.5kb的基因組DNA長模板。Phusion聚合酶的最佳聚合能力是在720℃。Phusion還可用於克隆測序、表達分析和突變分析。
Phusion DNA聚合酶具有3'-5'核酸外切酶活性。這允許在合成後對新合成的鏈進行校對。因此,核苷酸錯配很容易修復。因此,它具有較小的錯誤率。Phusion聚合酶的總體優勢是:;
- 極度忠誠
- 速度快,延長時間縮短
- 反應靈敏,需要最少的優化
- 高產
Phusion聚合酶的主要缺點是它在脫氧尿苷三磷酸(dUTP)的存在下被抑制。當dUTPs積累在反應混合物中時,可能會抑制Phusion聚合酶的作用。通過在添加酶之前用dUTPase處理反應混合物可以防止這種情況。目前,一種叫做Pfu-Turbo的抗dUTP的Phusion聚合酶變體被用來代替Phusion聚合酶來解決這個問題。
什麼是Taq聚合酶(taq polymerase)?
taqdna聚合酶的發明徹底改變了分子生物學領域。它解決了DNA擴增的一個主要問題。taqdna聚合酶是從嗜熱菌Thermus aquaticus中提取和分離的一種熱穩定的聚合酶酶。這種酶的發現導致了PCR的發展。這種酶使聚合酶鏈反應代替傳統的費力的克隆技術在DNA擴增中得到了應用。目前,PCR技術在分子診斷、農業和工業領域得到了廣泛的應用。
Taq-DNA聚合酶在720℃-800℃的最佳溫度範圍內發揮作用。taqdna聚合酶需要一個輔助因子,即鎂。Taq聚合酶不具備3'-5'的校對能力,因此,與Phusion聚合酶等較新類型的DNA聚合酶相比,Taq-DNA聚合酶的錯誤率較高,由於酶的方便性和靈活性,Taq-DNA聚合酶在科學界的流行程度保持不變。
普希(phusion)和Taq聚合酶(taq polymerase)的共同點
- Phusion和Taq聚合酶都是聚合酶,能夠在DNA鏈的3'自由端添加核苷酸。
- Phusion和Taq聚合酶都需要一個啟動聚合的引物序列。
- Phusion和Taq聚合酶都是熱穩定的。
- Phusion和Taq聚合酶都用於PCR擴增DNA。
- 在將聚合酶加入反應混合物時,最後加入Phusion和Taq聚合酶,以確保酶的效率。
- Phusion和Taq聚合酶都是為分子生物學實驗目的而商業化合成的。
- Phusion和Taq聚合酶都需要輔因子來完成其功能。
普希(phusion)和Taq聚合酶(taq polymerase)的區別
Phusion與Taq聚合酶 | |
Phusion是從糠秕熱球菌中分離出的一種DNA聚合酶,主要用於克隆實驗以提高保真度。 | Taq-DNA聚合酶是聚合酶鏈反應(PCR)中使用的標準DNA聚合酶,它是從耐熱細菌Thermus aquaticus中分離出來的。 |
源生物 | |
Phusion是從極端古生菌-糠秕焦球菌中提取的。 | 這些文學作品從殖民時期到非殖民化時期。 |
校對能力 | |
Phusion具有3'-5'校對能力。 | Taq聚合酶缺乏3'-5'校對能力。 |
忠誠 | |
高保真與Phusion在一起。 | Taq聚合酶保真度低。 |
放大 | |
Phusion能夠擴增長的DN**段。 | Taq聚合酶能夠擴增出更短的DN**段。 |
杜仲中毒 | |
Phusion作用被累積奇數抑制。 | Taq聚合酶不被dUPT抑制。 |
總結 - 普希(phusion) vs. Taq聚合酶(taq polymerase)
Phusion和taqdna聚合酶是兩種用於PCR技術的熱穩定聚合酶。Phusion是從極端微生物糠秕熱球菌中分離出來的一種聚合酶,而Taq是從耐熱細菌Thermus aquaticus中分離出來的。taqdna聚合酶的發現導致了PCR的發明。與Taq相比,Phusion有許多優勢,這使得Phusion成為生產高保真DNA的更好選擇。然而,Taq聚合酶仍然是PCR的標準聚合酶。這就是Phusion和Taq聚合酶的區別。
引用
1.新英格蘭生物實驗室。新英格蘭生物實驗室:生命科學工業用試劑。這裡有2。“Phusion DNA聚合酶。”新英格蘭生物實驗室。這裡有
2.“Phusion DNA聚合酶”,新英格蘭生物實驗室