馬克薩姆·吉爾伯特(maxam gilbert)和雙脫氧測序法(sanger sequencing)的區別
核苷酸是DNA的基本結構單元和構建單元。DNA分子是由多核苷酸鏈組成的。DNA中有四種不同的核苷酸。這些核苷酸由四種不同的含氮鹼基組成，分別命名為A（腺嘌呤）、G（鳥嘌呤）、C（胞嘧啶）、T（胸腺嘧啶）。DNA分子中核苷酸的排列順序對生物體的生長髮育起著重要的編碼作用。DNA測序是指確定DNA精確核苷酸序列的過程。有不同的DNA測序方法。Maxam-Gilbert測序和Sanger-DNA測序屬於第一代測序。Maxam-Gilbert測序程序通過化學裂解5'末端標記的DN**段在4個核苷酸中的每個核苷酸和凝膠電泳來確定鹼基序列。Sanger測序法通過DNA聚合酶、脫氧核苷酸和凝膠電泳合成單鏈DNA來確定核苷酸序列。這是Maxam-Gilbert和Sanger測序的關鍵區別。
內容1。概述和主要區別2。什麼是Maxam Gilbert3。什麼是桑格順序4。並肩比較——馬克薩姆·吉爾伯特vs桑格·順理成章5。摘要
什麼是maxam-gilbert測序(maxam gilbert sequencing)？
Maxam-Gilbert測序，又稱化學測序法，是一種測定DNA中核苷酸序列的技術。這種方法是由沃爾特·吉爾伯特和艾倫·馬克薩姆在1976年提出的，由於它可以直接用純化的DNA來進行，因而變得流行起來。Maxam-Gilbert法屬於第一代DNA測序方法，是第一種被科學家廣泛應用的測序方法。
該方法的基本原理是通過鹼基特定的化學物質和條件限制末端標記的DN**段在特定的鹼基上，並通過電泳分離標記片段，如圖01所示。根據凝膠上的大小將碎片分開。由於這些片段被標記，DNA分子的序列就可以很容易地推斷出來。
Maxam-gilbert方法使用鹼基特定的化學物質在特定的鹼基上破壞DNA。兩種常見的化學物質*****和肼分別用來選擇性地攻擊嘌呤和嘧啶。
Maxam-Gilbert測序法通過以下幾個步驟執行。
- Purification of the DNA sequence using restriction endonucleases
- Labeling of the ends of the DNA fragments by adding radioactive phosphates
- Purification of the labeled fragments from non-labeled fragments by gel electrophoresis
- Separation of the end-labeled DNA into four tubes and treating with base specific chemicals separately
- Electrophoresis of the contents of each tube on separate lines on a gel and fragment separation according to their length.
- Detection of the fragments by autoradiograph.
圖01:Maxam Gilbert測序
什麼是雙脫氧測序法(sanger sequencing)？
Sanger測序是由Frederick Sanger和他的同事在1977年開發的一種測序方法，用於確定給定DN**段的鹼基序列。它也被稱為鏈終止測序或雙脫氧測序法。該方法利用DNA聚合酶選擇性摻入ddGTP、ddCTP、ddtp和ddTTP等終止鏈的雙脫氧核苷酸（ddNTPs）來終止單鏈DNA的形成。雙脫氧核苷酸缺乏3'羥基，無法與相鄰核苷酸形成磷酸二酯鍵。因此，在sanger測序過程中，一旦ddNTP被納入新形成的鏈中，鏈的形成就停止了。
在這種方法中，四個獨立的DNA合成反應（PCR）在四個不同的試管中用一種類型的ddNTP進行。PCR的試管也有其他要求，包括引物、dNTPs、Taq聚合酶、特定條件等。在四個試管中用四種混合物進行四種不同的反應。PCR反應後，得到的DN**段經過熱變性並通過凝膠電泳分離。然後使用標記的（放射性或熒光）引物或dNTPs將碎片可視化，如圖02所示。
圖02：桑格測序
馬克薩姆·吉爾伯特(maxam gilbert)和雙脫氧測序法(sanger sequencing)的區別
| Maxam Gilbert vs Sanger測序 | |
| Maxam-Gilbert測序是第一種DNA測序技術。 | Sanger測序法是繼Maxam-Gilbert測序法之後引入的。 |
| 使用 | |
| 這種方法很少使用。 | 桑格測序通常用於測序。 |
| 危險化學品的使用 | |
| 它使用危險化學品。 | 與Maxam-Gilbert方法相比，危險化學品的使用受到限制。 |
| 檢測用標籤 | |
| 這種方法使用放射性P32標記DN**段的末端。 | Sanger測序使用放射性或熒光標記的ddNTPs。 |
總結 - 馬克薩姆·吉爾伯特(maxam gilbert) vs. 雙脫氧測序法(sanger sequencing)
Maxam-Gilbert和Sanger測序是第一代DNA測序中的兩種DNA測序技術。Maxam-Gilbert測序是1976年引入的第一種DNA測序方法，它是通過鹼基特**化學物質破壞末端標記的DN**段來完成的。因此，它被稱為化學測序。Sanger測序法於1977年提出，是基於ddNTP驅動的鏈終止反應。由於Maxam-Gilbert法存在時間消耗過大、使用危險化學品等缺點，Sanger測序法比Maxam-Gilbert法更受歡迎，這就是Maxam-Gilbert測序與Sanger測序的區別。
R參考：1.Maxam早上好，還有沃爾特·吉爾伯特。“DNA測序的新方法”，《國家科學院學報》。國家Acad科學，1976年12月9日。網狀物。2017年3月30日。希瑟，詹姆斯M.，和本傑明·查因。“測序儀的序列：DNA測序的歷史”，基因組學。學術出版社，2016年1月。網狀物。2017年3月30日，帕雷克、錢德拉·謝哈爾、拉法爾·斯莫欽斯基和安德烈·特列恩。“測序技術和基因組測序”，《應用遺傳學雜誌》。斯普林格·韋拉格，2011年11月。網狀物。2017年3月30日
