什么是北部印迹?(a northern blot?)

北方印迹杂交是一种用于检测样品中信使RNA(mRNA)水平的技术,并对存在的mRNA的数量进行量化。尽管存在其他更强大的技术,但由于其简单和易于使用,北方印迹仍然是标准。北方印迹技术还允许在一次实验中直接比较多个样品。...

北方印迹杂交是一种用于检测样品中信使RNA(mRNA)水平的技术,并对存在的mRNA的数量进行量化。尽管存在其他更强大的技术,但由于其简单和易于使用,北方印迹仍然是标准。北方印迹技术还允许在一次实验中直接比较多个样品。

信使RNA是一种核酸,当基因被表达时就会产生。一个在细胞内被开启并发挥作用的基因被转录成mRNA。然后mRNA被运送到细胞的细胞质中,在那里被翻译成蛋白质。因此,细胞mRNA样本的Northern印迹分析可以提供关于细胞正在产生的蛋白质阵列的有用信息。

在Northern印迹中,mRNA从细胞中提取并通过变性琼脂糖凝胶电泳,这使得样品中的mRNA可以根据大小被分离。同时运行已知大小的mRNA分子样本,以提供一个对照。一旦电泳完成,样品被转移并固定在一个固体膜上,通常由尼龙等材料制成。然后在分析前将样品暴露在放射性标记的探针下几个小时。在分析过程中,与放射性标记探针杂交的mRNA可以用X射线清楚地检测出来。

北方印迹技术允许观察不同组织类型之间的基因表达模式。从各种不同组织和器官类型的细胞中提取的信使RNA可以被比较,并且可以检查细胞对压力、感染和许多其他刺激的反应。通过观察不同条件下mRNA表达的差异,科学家可以确定一个细胞对某些刺激的反应产生什么类型的蛋白质。这可以提供关于未知蛋白质功能的线索,或者在已知蛋白质的情况下,提供关于细胞对有关刺激的反应的信息。

例如,北方印迹可能显示,一种未知的蛋白质的表达在对特定毒素的存在作出反应时增加。然后可以推测,该蛋白参与了降低毒性,也许是通过将化学品运出细胞或将其转化为代谢物。如果已知的蛋白质正在接受检查,记录蛋白质表达的变化可以提供关于反应本身的信息。例如,如果一个已知的分子转运体的表达量增加,就可以证实细胞对毒素的反应是将毒素转运出细胞。

  • 发表于 2022-02-09 18:21
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  • 分类:科学

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