微阵列(microarray)和rna测序(rna sequencing)的区别
转录组代表存在于细胞中的RNA的全部内容,包括mRNA、rRNA、tRNA、降解RNA和非降解RNA。转录组分析是理解细胞洞察力的一个重要过程。有几种高级的转录组分析方法。微阵列和RNA测序是两种用于分析转录组的技术。微阵列与RNA测序的关键区别在于,微阵列是基于预先设计的标记探针与靶cDNA序列的杂交潜力,而RNA测序是基于通过NGS等先进测序技术对cDNA链的直接测序。微阵列是利用序列的先验知识进行的,而RNA测序是在没有序列先验知识的情况下进行的。
内容1。概述和主要区别2。什么是微阵列3。什么是RNA序列4。并行比较——微阵列与RNA序列5。摘要
什么是微阵列(microarray)?
微阵列是一种稳健、可靠、高通量的转录组分析方法。这是目前最流行的转录分析方法。这是一种低成本的方法,它依赖于杂交探针。
该技术首先从样品中提取mRNA,然后从总RNA中构建cDNA文库。然后将其与荧光标记的预先设计的探针混合在固体表面(斑点矩阵)。互补序列与微阵列中的标记探针杂交。然后对微阵列进行清洗和筛选,并对图像进行量化。对收集到的数据进行分析,得到相对的表达式轮廓。
微阵列探针的强度假定与样本中转录物的数量成比例。然而,该技术的准确性取决于所设计的探针、序列的先验知识以及杂交探针的亲和力。因此微阵列技术有其局限性。微阵列技术不能用于低丰度转录。它不能区分亚型和识别遗传变异。由于这种方法依赖于探针的杂交,因此在微阵列技术中存在一些与杂交有关的问题,如杂交、非特**杂交等。
什么是rna测序(rna sequencing)?
RNA鸟枪测序(RNA-seq)是近年来发展起来的一种全转录组测序技术。这是一种快速、高通量的转录组分析方法。它直接量化基因的表达,并导致对转录组的深入研究。RNA序列不依赖于预先设计的探针或序列的先验知识。因此,RNA-seq方法具有较高的灵敏度和检测新基因和遗传变异的能力。
RNA测序法是通过几个步骤来完成的。细胞的总RNA必须分离并破碎。然后,利用逆转录酶制备cDNA文库。每个cDNA链必须与适配器连接。然后连接的片段必须被扩增和纯化。最后使用NGS方法,必须对cDNA进行测序。
微阵列(microarray)和rna测序(rna sequencing)的区别
微阵列与RNA测序 | |
微阵列是一种稳健、可靠、高通量的方法。 | RNA测序是一种准确、高通量的方法。 |
成本 | |
这是一种低成本的方法。 | 这是一种昂贵的方法。 |
大量样品分析 | |
这有助于同时分析大量样本。 | 这有助于分析大量样本。 |
数据分析 | |
数据分析很复杂。 | 这种方法生成的数据更多,因此过程更复杂。 |
序列的先验知识 | |
这种杂交方法需要先验的杂交探针知识。 | 该方法不依赖于先验序列知识。 |
结构变异与新基因 | |
这种方法不能检测结构变异和新基因。 | 这种方法可以检测基因融合、选择性剪接和新基因等结构变异。 |
敏感 | |
这不能检测到异构体表达的差异,所以它的灵敏度有限。 | 这有很高的灵敏度。 |
结果 | |
这只会导致相对表达式级别。这并不能给出基因表达的绝对量化。 | 它给出了绝对和相对的表达水平。 |
数据再分析 | |
这需要重新运行才能重新分析。 | 测序数据可以重新分析。 |
对特定人员和基础设施的需求 | |
微阵列不需要特定的基础设施和人员。 | RNA测序所需的特定基础设施和人员。 |
技术问题 | |
微阵列技术存在交叉杂交、非特**杂交、单个探针检测率有限等技术问题。 | RNA序列技术避免了交叉杂交、非特**杂交、单个探针检测率有限等技术问题。 |
偏见 | |
这是一种有偏见的方法,因为它依赖于杂交。 | 与微阵列相比,偏差较低。 |
总结 - 微阵列(microarray) vs. rna测序(rna sequencing)
微阵列和RNA测序方法是为转录组分析开发的高通量平台。这两种方法产生的结果与基因表达谱高度相关。然而,RNA测序在基因表达分析方面比微阵列有优势。RNA测序是一种比微阵列更灵敏的检测低丰度转录物的方法。RNA测序还可以区分异构体和识别基因变体。然而,由于RNA测序是一种新的昂贵的技术,具有数据存储和复杂数据分析的困难,因此微阵列是大多数研究者的共同选择。
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