PCR與實時PCR
PCR或聚合酶鏈反應是現代分子生物學中一個革命性的發現,最早由化學家卡里·穆利斯(Kary Mullis)於1983年提出。它允許複雜DNA中的一個單一序列被擴增出來進行分析。聚合酶鏈反應的基本思想是,兩個引物,互補的DNA序列的相反鏈,是指向對方;引物產生互補鏈,每一個包含另一個引物。因此,結果是在兩個引物之間有一個與DNA相對應的大量序列。DNA聚合酶酶用於PCR擴增引物。DNA聚合酶是一種耐高溫的酶,能夠在用於模板DNA變性的高溫(94~95℃)下存活。
PCR包括三個步驟,即反覆變性、引物退火和DNA合成。一個熱循環機器被用來執行這個反應,這樣它就可以被編程來快速而準確地改變溫度。PCR的應用包括刑事調查、DNA指紋圖譜、病原體檢測和早期人類DNA分析。
什麼是常規PCR?
常規PCR有三個主要階段,即DNA擴增階段、PCR分離和產物檢測。DN**段的分離通常是通過瓊脂糖凝膠電泳完成的。然後用溴化乙錠對產品進行染色。最後,在紫外光照射下,通過凝膠上的可見帶實現檢測。因此,常規PCR的最終結果不能用數字表示。通常常規的PCR只能檢測單個參數。
什麼是實時PCR?
在合成產物的過程中,實時PCR可以檢測產物的擴增情況。隨著科學技術的發展,PCR技術已經成為一種非常流行的技術,特別是在食品中細菌的檢測和鑑定方面。實時PCR使用熒光染料系統和具有熒光檢測能力的熱循環器。
傳統PCR和實時PCR有什麼區別?
•傳統的PCR由於使用凝膠電泳分析擴增的PCR產物而更加耗時。相比之下,實時聚合酶鏈反應(real-time-PCR)耗時更少,因為它可以在反應的早期階段檢測到擴增。
•實時PCR在PCR的指數增長階段收集數據,而傳統PCR在反應終點收集數據。
•常規PCR的終點結果可能不太精確,但實時PCR的結果非常精確。
•實時PCR比傳統PCR更敏感。
•傳統的PCR分辨率很低,而實時PCR由於分辨率高,可以檢測到很少的變化。
•常規PCR終點檢測動態範圍短,實時PCR檢測動態範圍寬。
•與傳統PCR不同,實時PCR中有自動檢測技術。
•傳統的PCR比實時PCR更為複雜和勞動密集。
•與實時PCR不同,傳統PCR無法區分死菌和活菌。