PCR与实时PCR
PCR或聚合酶链反应是现代分子生物学中一个革命性的发现,最早由化学家卡里·穆利斯(Kary Mullis)于1983年提出。它允许复杂DNA中的一个单一序列被扩增出来进行分析。聚合酶链反应的基本思想是,两个引物,互补的DNA序列的相反链,是指向对方;引物产生互补链,每一个包含另一个引物。因此,结果是在两个引物之间有一个与DNA相对应的大量序列。DNA聚合酶酶用于PCR扩增引物。DNA聚合酶是一种耐高温的酶,能够在用于模板DNA变性的高温(94~95℃)下存活。
PCR包括三个步骤,即反复变性、引物退火和DNA合成。一个热循环机器被用来执行这个反应,这样它就可以被编程来快速而准确地改变温度。PCR的应用包括刑事调查、DNA指纹图谱、病原体检测和早期人类DNA分析。
什么是常规PCR?
常规PCR有三个主要阶段,即DNA扩增阶段、PCR分离和产物检测。DN**段的分离通常是通过琼脂糖凝胶电泳完成的。然后用溴化乙锭对产品进行染色。最后,在紫外光照射下,通过凝胶上的可见带实现检测。因此,常规PCR的最终结果不能用数字表示。通常常规的PCR只能检测单个参数。
什么是实时PCR?
在合成产物的过程中,实时PCR可以检测产物的扩增情况。随着科学技术的发展,PCR技术已经成为一种非常流行的技术,特别是在食品中细菌的检测和鉴定方面。实时PCR使用荧光染料系统和具有荧光检测能力的热循环器。
传统PCR和实时PCR有什么区别?
•传统的PCR由于使用凝胶电泳分析扩增的PCR产物而更加耗时。相比之下,实时聚合酶链反应(real-time-PCR)耗时更少,因为它可以在反应的早期阶段检测到扩增。
•实时PCR在PCR的指数增长阶段收集数据,而传统PCR在反应终点收集数据。
•常规PCR的终点结果可能不太精确,但实时PCR的结果非常精确。
•实时PCR比传统PCR更敏感。
•传统的PCR分辨率很低,而实时PCR由于分辨率高,可以检测到很少的变化。
•常规PCR终点检测动态范围短,实时PCR检测动态范围宽。
•与传统PCR不同,实时PCR中有自动检测技术。
•传统的PCR比实时PCR更为复杂和劳动密集。
•与实时PCR不同,传统PCR无法区分死菌和活菌。