主要差异pcr(main difference pcr) vs. 质量控制报告(qpcr)

聚合酶链反应（PCR）和定量PCR（qpr）是生物技术中用于扩增DNA的两种技术，其目的是为多种目的而进行扩增。PCR是一种相对简单的技术。qPCR也称为实时PCR或数字PCR。PCR与qpr的主要区别在于PCR是一种定性技术，qpr是一种定量技术。PCR允许将结果读取为“存在或不存在”。但在qpr中，每个周期扩增的DNA量都是定量的。如果将RNA用于PCR，则称为RT-PCR（逆转录PCR），如果RNA用于qpr，则称为qRT-PC。

覆盖的关键领域

1.什么是PCR–定义、过程、用途2.什么是QPCR–定义、过程、用途3.PCR和QPCR之间的相似之处是什么–共同特征概述4.PCR和QPCR之间的区别是什么–关键区别的比较

关键词：琼脂糖凝胶电泳、扩增子、DNA聚合酶、荧光染料、PCR、探针、qPCR、RT-qPCR

什么是聚合酶链反应(pcr)？

PCR是指生物技术中的一种技术，它通过放大选定的DN**段，对短序列的DNA进行分析。由于单反应需要很小的体积，所以它是一种比较敏感的方法。该技术基于DNA聚合酶的能力，以互补的方式将新的DNA链合成到所提供的模板链。PCR反应混合物由DNA聚合酶、DNA核苷酸、引物、待扩增DNA模板和镁组成。放大在一个热循环器内进行。DNA聚合酶应具有耐热性，因为在这种反应中使用高温。PCR中使用的两种DNA聚合酶分别是Taq-DNA聚合酶和Pfu-DNA聚合酶。Taq-DNA聚合酶在PCR中得到了广泛的应用。

DNA聚合酶需要在3′端预先存在一条DNA链来合成一条新的DNA链。因此，将寡核苷酸引物添加到反应混合物中以开始DNA合成。PCR对引物的要求只允许扩增模板中的一个特定区域。靶序列两侧有正向和反向引物。在PCR结束时，一个特定DNA序列的新拷贝（称为扩增子）以数十亿的形式累积。应优化PCR的成分，以提高PCR性能，同时最大限度地减少故障。标准PCR反应如图1所示。

Figure 1: PCR

pcr步骤

PCR的三个步骤如下所述。

1. 变性-双链DNA模板通过加热到94-95分为两条单链°C.
2. 退火-正向和反向引物结合到模板中的互补序列。温度取决于底漆混合物的熔化温度。
3. 引物延伸-DNA聚合酶通过向生长链中添加互补碱基，在每个引物的3'端延伸。Taq聚合酶的最适温度为72℃°C、 用作延伸步骤中的温度。扩展的时间取决于模板链中的碱基对数。

这三个步骤重复28-35次。琼脂糖凝胶电泳用于PCR产物的大小分级。产品用溴化乙锭染色，在紫外线下观察。PCR产物或扩增的DNA可用于克隆、测序或基因分型。

什么是质量控制报告(qpcr)？

QPCR是指生物技术中的一种技术，它允许检测、表征和定量核酸以用于各种应用。因此，它是一种定量PCR。DNA和RNA均可作为qPCR。如果以RNA为模板，则应首先将其反转录成cDNA。因此，这种类型的qPCR被称为RT-qPCR。传统的PCR是对cDNA或常规DNA样品进行的。然而，在qPCR中，荧光染料用于在PCR循环的每个步骤中标记PCR产物。这使得能够随着PCR的进行而收集数据，允许在PCR的指数阶段对扩增子进行定量。qPCR中使用的主要染料是SYBR绿。染料与双链DNA结合。由于荧光与扩增DNA的数量成比例增加，因此可以“实时”进行定量。使用染料的主要缺点是它允许对样品中的一种特定产物进行定量。除了染料，探针也可以用于定量过程。TaqMan探针是qPCR中使用的主要寡核苷酸探针类型之一，荧光发射过程如图2所示。

Figure 2: TaqMan Probe

探针的设计可以检测同一样本中的多个PCR产物。TaqMan探针是水解探针的主要类型之一；将此探针并入PCR产物中暴露荧光团，发射荧光。荧光染料对PCR产物更具特**。因此，它们在大多数诊断分析中用于检测PCR产物。

pcr与qpcr的相似性

• PCR和qPCR是生物技术中用于扩增DNA的两种技术。
• 传统的聚合酶链反应是PCR和qPCR的核心技术。
• RNA作为第一反应，可用于PCR和qPCR。

聚合酶链反应(pcr)和质量控制报告(qpcr)的区别

定义

聚合酶链反应：聚合酶链反应是一种生物技术，它允许通过扩增选定的DN**段来分析DNA的短序列。

QPCR：QPCR是生物技术中的一种技术，它允许对各种应用的核酸进行检测、表征和定量。

定量/定性

PCR：PCR是一种定性技术。

QPCR:QPCR是一种定量技术。

产品检测

PCR：PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测。

QPCR：在QPCR的每个扩增周期中都能检测到产物。

数据收集

PCR：在PCR反应结束时收集数据。

QPCR：在QPCR反应的指数阶段收集数据。

决心

PCR：PCR的分辨率很低。

QPCR:QPCR具有非常高的分辨率。

染料

PCR：PCR过程中使用溴化乙锭对产物进行染色。

QPCR：QPCR使用荧光染料来检测产品。

时间

PCR：PCR是一种比较耗时的方法。

QPCR:QPCR比较省时。

核糖核酸

PCR:RT-PCR是一种以RNA为模板的PCR方法。

QPCR:RT-QPCR是一种以RNA为模板的QPCR。

角色

聚合酶链反应：聚合酶链反应是用来检测是否存在某些基因组片段。

QPCR：QPCR用于量化样本中的特定片段。

结论

PCR和qPCR是生物技术中用于扩增DNA的两种技术。PCR是一种传统的用于鉴定DN**段存在与否的扩增方法。QPCR用于量化样本中的特定片段。因此，PCR是一种定性技术，而qPCR是一种定量技术。这是PCR和qPCR的主要区别。

引用

1.“QPCR对比数字PCR对比传统PCR。” Thermo Fisher Scientific，此处提供。